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上海申知心生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 高血脂癥動物模型,心血管疾病動物模型,缺血性心臟病動物模型 |
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2018-9-13 閱讀(2770)
彌散性血管內(nèi)凝血(disseminated intravascular coagulation, DIC)是臨床上一種獲得性綜合征,，它可由各種不同的原因引發(fā),。臨床上DIC主要表現(xiàn)為由微血管血栓形成和栓塞引起的多臟器功能障礙、出血,、休克和微血管病性溶血性貧血,。 DIC代表了臨床病理的一系列連續(xù)的嚴重表現(xiàn)，其主要特征是血管內(nèi)凝血機制激活后,，其局限性或代償性控制進行性喪失,。DIC的發(fā)生及發(fā)展機制十分復(fù)雜，許多影響因素至今仍未闡明,。無論在何種原發(fā)病或何種因素誘導(dǎo)下發(fā)生 DIC,，機體凝血系統(tǒng)活化均既存在順序性級聯(lián)反應(yīng)的特征,，也存在正、負反饋使凝血反應(yīng)放大或受到限制的特征,。 DIC時通常顯示纖維蛋白分布在多種器官中,，是導(dǎo)致器官功能衰竭的原因?？鼓委熓亲钄郉IC病理過程的重要措施之一,，其目的在于抑制廣泛性微血栓形成的病理過程，防止血小板及各種凝血因子進一步消耗,。為恢復(fù)其正常含量,、重建正常的凝血與抗凝血平衡創(chuàng)造條件。因此,，建立理想的 DIC動物模型,，用于實驗研究非常重要。
1 高分子右旋糖酐誘導(dǎo)大鼠彌散性血管內(nèi)凝血模型
(1)復(fù)制方法 體重為250～400g,、10月齡雄性Wistar大鼠,。按30mg/kg體重的劑量經(jīng)腹腔注射戊丨巴丨比丨妥丨鈉麻醉，大鼠仰臥固定于手術(shù)臺上,，頸部皮膚常規(guī)消毒與去毛,。無菌手術(shù)暴露頸動脈、靜脈,，分別插管,。用130g/L高分子右旋糖酐(分子量為480000)按15ml/kg體重的劑量經(jīng)頸靜脈注射，1min或3min注完,。于給藥*min及給藥后10,、20、30min進行微循環(huán)觀察,，經(jīng)顯微電視錄像觀察回腸下段腸系膜血管(包括一二級微動脈和一二級微靜脈)流態(tài)以及微血流流態(tài),、血細胞聚集情況；給藥后30min時,，經(jīng)模型大鼠頸動脈取血作相關(guān)凝血功能指標的檢測,，并進行血漿魚精蛋白副凝試驗(3R試驗)；主要觀察指標：模型大鼠微循環(huán)積分值,、全血黏度,、血漿黏度、相對黏度,、血小板黏附率和聚集率,、血小板計數(shù)、血漿凝血酶原時間,、纖維蛋白原水平,、裂體細胞檢查,。注射后30min麻醉處死大鼠，分別取其肺,、腎,、心等組織經(jīng)10％甲醛溶液固定后，作常規(guī)組織切片,，HE染色,，光鏡下形態(tài)學觀察。
(2)模型特點 模型動物微血管流態(tài)變化突出,，注射高分子右旋糖酐后流速變慢,、血細胞淤滯、聚集,、微血流呈粒緩流,，出現(xiàn)嚴重的微循環(huán)障礙。用田牛氏微循環(huán)加權(quán)積分標準計算流態(tài)積分值,，發(fā)現(xiàn)模型大鼠流態(tài)積分值明顯高于實驗前和正常對照動物,，這些變化細動脈比細靜脈更明顯。造模后,，模型動物血小板黏附率,、聚集率明顯增強，血小板計數(shù)顯著減少,，凝血酶原時間延長,，纖維蛋白原降低，與正常動物相比有顯著性差異,；模型動物3R試驗均為陽性,。鏡下病理組織學觀察顯示：模型大鼠可見纖維索性血栓和混合血栓,，尤以肺內(nèi)多見,，其血涂片可見大量裂體細胞。本方法復(fù)制的大鼠DIC模型屬于急性型,，其特點為凝血因子的消耗性減少,、繼發(fā)纖溶系統(tǒng)的亢進、血液流變學和微循環(huán)的明顯障礙,。本模型制作方法簡便,，應(yīng)用范圍廣，效果穩(wěn)定,。
(3)比較醫(yī)學 本模型的致病機制是當靜脈注射高分子右旋糖酐后,，模型大鼠微血流積分值升高，血流變慢,；血液流動性的異常,，導(dǎo)致了機體血管舒縮功能的紊亂,，為DIC的發(fā)生創(chuàng)造了條件，此時無論血管收縮,、血流減少,，還是血管舒張、血流淤滯,，都不利于促凝物質(zhì)和活化凝血因子從局部清除,，而有利于纖黏蛋白(FN)在局部沉降。此外注射高分子右旋糖酐后模型動物的血黏度,、血漿黏度,、血小板黏附和聚集性均明顯增強，導(dǎo)致機體血液動力學出現(xiàn)異常,。由于血液動力學異常和血流阻力的變化密切相關(guān),，當血黏度增高時，血流阻力明顯加大,，其直接的結(jié)果就是造成微循環(huán)的明顯障礙,，導(dǎo)致組織細胞包括內(nèi)皮細胞的損害，進而加重微循環(huán)障礙,，如此惡性循環(huán)推動模型動物DIC的進展,。本模型的疾病特征與臨床患者的DIC類似，適用于DIC藥物治療和藥物篩選方面的實驗研究,。
2 脂多糖誘導(dǎo)兔彌散性血管內(nèi)凝血模型
(1)復(fù)制方法 體重2kg左右雄性新西蘭兔,，按30mg/kg體重的劑量經(jīng)耳緣靜脈注射戊丨巴丨比丨妥丨鈉麻醉，麻醉后將兔仰臥固定于手術(shù)臺上,，頸部皮膚常規(guī)消毒與去毛,。頸部正中無菌手術(shù)作一切口，鈍性分離左側(cè)頸總動脈,，結(jié)扎動脈遠心端,，用18G靜脈插管針穿刺并固定，以備留取標本用,。按2.5mg/kg體重的劑量經(jīng)兔耳緣靜脈緩慢注入脂多糖(lipopolysaccharide),，分2次注射給藥，間隔1h,，每次脂多糖注射時間約為10min,。注射脂多糖前及注射后2、4,、6h分別采取兔血作活化部分凝血活酶時間(APTT),、纖維蛋白原、血小板計數(shù)、抗凝血酶Ⅲ,、血清纖維蛋白降解產(chǎn)物(FDP)檢測,。并于造模結(jié)束時麻醉處死動物，取心,、肺,、腎、脾與肝組織,，用10％甲醛溶液固定,，作常規(guī)組織切片，HE染色,，光鏡下觀察,。
(2)模型特點 注射脂多糖后，模型兔活化部分凝血活酶時間明顯延長,，血小板計數(shù)和纖維蛋白原顯著降低,，抗凝血酶Ⅲ活性明顯下降，血清FDP無明顯變化,。鏡下病理組織學觀察顯示,，模型兔的心、肝,、肺,、腎、脾臟均可見微血栓形成,，肺組織中尚有大量炎癥細胞浸潤,。
(3)比較醫(yī)學 DIC是一種彌散而隱匿的血管內(nèi)血液凝固現(xiàn)象，它可導(dǎo)致機體凝血因子不斷消耗,，臨床上可造成患者廣泛出血,。本模型制作過程中，當注射脂多糖后兔的靜脈穿刺部位有滲血,，30min時動物出現(xiàn)呼吸頻率明顯增快,、紫紺，血小板數(shù)量呈進行性降低,，APTT明顯延長,；鏡下病理組織學觀察心,、肺,、肝、腎,、脾組織內(nèi)均有纖維蛋白血栓形成,，證實靜脈注射脂多糖可成功復(fù)制兔DIC模型。但模型動物血FDP無明顯改變,，表明脂多糖引起的DIC以消耗性凝血為主,，纖溶活性改變不大,；同時模型動物注射脂多糖后2、4,、6h后APTT均顯著延長,，提示脂多糖誘發(fā)DIC過程中機體內(nèi)源性凝血途徑被啟動，此時體內(nèi)可通過外源性和內(nèi)源性途徑生成凝血酶,，后者有廣泛的促凝血和促血栓形成作用,。本方法復(fù)制的DIC模型顯示纖維蛋白分布在多種器官中，可導(dǎo)致模型動物發(fā)生多器官功能衰竭,，模型DIC表現(xiàn)與臨床上人類發(fā)生的DIC相似,，可用于DIC發(fā)病機制及藥物篩選方面的實驗研究。
