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注意事項:
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。設立一個的PCR實驗室,。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有大影響,。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,,純化的方法越簡單越好,。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。產品僅用于科研操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用高質量的新鮮雙蒸水,,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌,。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌,。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻,。
參數規(guī)格:
產品名稱:休斯新孢子蟲PCR檢測試劑盒價格
英文名稱:Neospora hughsiPCR
產品規(guī)格:50T
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
產品特點:
本產品就是根據保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產品,。?
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產品僅用于科研按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序,。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增,。一般:在93℃預變性3-5min,,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,,在72℃ 保7min,。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油,;否則,,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實驗步驟:
產品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板,;(2)引物與模板退火,;(3)引物沿模板延伸三步反應組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應,,使目的DNA得以迅速擴增,。其主要步驟是:
將待擴增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復性溫度下分別與目的基因兩側的兩條單鏈互補結合,,兩個引物在模板上結合的位置決定了擴增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,,合成DNA的新互補鏈,。
休斯新孢子蟲PCR檢測試劑盒價格原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,,經過n個熱循環(huán)擴增,,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能,。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合,;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性,;
④靶基因的特異性與保守性,。
磷脂酰乙醇25克,Sigma-Aldrich,、Amresco,、Amersham、Serva,、AppliChem等品牌,,中文名稱: 磷脂酰乙醇其他名稱: 乙醇磷甘油酯;腦磷脂,;L-α-磷酯酰乙醇,;1,2-二脂酰-sn-甘油-3-磷-O-乙醇;3-Sn-磷脂酰乙醇英文名稱: PE其他名稱: L-α-Cephalin,;L-α-Phosphatidylethanolamine,;Cephalin;Kephalin,;1,2-Diacyl-sn-glycero-3-phospho-O-ethanolamine,;3-sn-Phosphatidylethanolamine產品規(guī)格: BR,98%
N,N,N,N-四甲基乙二其他名稱: 四甲替乙二,;四甲基乙撐二,;N,N,N’,N’-四甲基-1,2-乙二;1,2-雙(二甲氨基),;1,2-雙(二甲基氨基)乙,;四甲基-1,2-亞乙基二英文名稱: TEMED其他名稱: TMEDA;N,N,N′,N′-Tetramethylethylenediamine,;1,2-Di(dimethylamino)ethane產品規(guī)格: BR,,98%包裝:100毫升/500毫升CAS號:110-18-9
N,N,N,N-四甲基對二二鹽鹽英文名稱: TMPD其他名稱: N,N,N N-Tetramethyl-P-phenylenediamine 2HC1;Wurster's Reagent產品規(guī)格: BR,,98%包裝:1克/5克/25克CAS號:637-01-4C6H4[N(CH3)2]2 ·2HC1=237.17
1-(3-二甲基丙基)-3-乙基碳二亞中文名稱: 1-(3-二甲基丙基)-3-乙基碳二亞其他名稱: 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞,;1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二;1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞;1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳酰亞英文名稱: EDC其他名稱: WSC,;N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide,;N-Ethyl-N'-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide產品規(guī)格: 特純,98%包裝:5克/25克/100克
1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亞鹽鹽100克,,Sigma-Aldrich,、Amresco、Amersham,、Serva,、AppliChem等品牌,500克,,Sigma-Aldrich,、Amresco、Amersham,、Serva,、AppliChem等品牌,中文名稱: 1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亞鹽鹽其他名稱: 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞鹽鹽,;1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞鹽鹽,;1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞鹽鹽;1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞鹽鹽英文名稱: EDC•HC1其他英文名稱: EDAC•HC1,;N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide,;1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride
酚酞單磷環(huán)己鹽英文名稱: Phenolphthalein monophosphate bis(cyclohexylammonium) salt其他名稱: Phenolphthalein monophosphate dicyclohexylammonium salt產品規(guī)格: BR,90%包裝:1克CAS號:14815-59-9C20H15O7P · 2C6H13N=596.65
聚丙烯酰其他名稱: 三號凝聚劑,;雙丙丙烯酰235溶液,;絮凝劑3號英文名稱: PAM其他名稱: PHⅢ;Polyacrylamide,;2-Propenamide homopolymer產品規(guī)格: BR,,MV>300萬包裝:250克/1公斤CAS號:9003-05-8
甲酰英文名稱: Benzamide其他名稱: Benzene carbonamide;Benzoic amide產品規(guī)格: CP包裝:25克/100克/500克CAS號:55-21-0C7H721.13
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