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收貨處理取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2,，飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)

傳代密度細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)

傳代代數(shù)可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳

傳代比例傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿,。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿

傳代方法

1.吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3.用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4.待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基。

質(zhì)量檢測：纖維連接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽性,，純度高于 90%,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等

產(chǎn)品規(guī)格：5x105cells/T25或1mL凍存管

培養(yǎng)基：豬乳腺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳,；溫度：37℃

換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%

產(chǎn)品貨期現(xiàn)貨，1周左右

運(yùn)輸方式T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應(yīng)限制僅限于科學(xué)研究,，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

1.準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面,，紫外線消毒20分鐘,。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部,。

2.布局：點(diǎn)燃酒精燈,，安裝吸管帽。

3.處理組織：把組織塊置于燒杯中,，用Hanks液漂洗2~3次,，去除血污；如懷疑組織可能污染,，可先置于含有青的混合液中30~60分鐘。

4.剪切：用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊,，以便于消化,。加入比組織塊總量多30~50倍的液，然后一并倒入三角燒瓶中,，結(jié)扎瓶口或塞以膠塞,。

5.消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可,，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次,，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨?。消化時(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6.分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時(shí),，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察,，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化,，隨即通過適宜不銹鋼篩,，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500~1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘,，吸出上清,，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7.計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大,，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中,。對大多數(shù)細(xì)胞來說,，pH要求在7.2~7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色,，如顏色偏黃,，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整,。

8.培養(yǎng)：置于36.5℃溫箱培養(yǎng),，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶蓋需擰松半圈,。

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