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原代細胞的分離培養(yǎng)：

原代培養(yǎng)即直接從有機體取下細胞,、組織或器官,，讓它們在體外維持與生長,。原代培養(yǎng)的特點是細胞或組織剛離開機體，它們的生物性狀尚未發(fā)生很大的改變，在一定程度上可反映它們在體內(nèi)的狀態(tài),，表現(xiàn)出來源組織或細胞的特性， 因此用于藥物實驗,，尤其是藥物對細胞活動,、結(jié)構(gòu)、代謝,、有無毒性或殺傷作用等,，是的工具。常用的原代培養(yǎng)法有組織塊培養(yǎng)法和消化培養(yǎng)法,。

（一）組織塊培養(yǎng)法

許多實驗室喜歡用組織塊培養(yǎng)法進行原代培養(yǎng),，因為方法簡單，細胞也較容易生長,。尤其是培養(yǎng)心肌,，有時還可觀察到心肌組織塊搏動。細胞從組織塊邊緣向外長出并鋪滿培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶后,， 即可進行傳代,。

1. 設(shè)備材料

培養(yǎng)箱、冰箱,、超凈工作臺／無菌間,、無菌吸管、離心管,、酒精燈,、試管架、培養(yǎng)瓶,、培養(yǎng)皿,、消化液、基礎(chǔ)培養(yǎng)液,、胎牛血清,、Hanks 溶液、雙抗試液,、剪刀,、攝子、小燒杯,。

2. 操作步驟

（1） 在無菌條件下,，取待培養(yǎng)的組織適量，置入小燒杯中,， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次,，去掉組織塊表面的血污,。

（2）用眼科剪將組織塊反復(fù)剪成0.5~ 1mm3的小塊。

（3）再用Hanks 溶液反復(fù)漂洗,， 直至液體不混濁為止,。等組織塊下沉，將燒杯傾斜,，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液,。

（4）用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml、200μg/ml）的培養(yǎng)液再清洗,，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養(yǎng)液,。

（5）用彎頭吸管吸取組織小塊，均勻地置于培養(yǎng)皿內(nèi)表面,，吸去多余的培養(yǎng)液，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜,。蓋好培養(yǎng)皿蓋,，做好標記， 置37°C 的CO2培養(yǎng)箱內(nèi),。

（6） 2~4h 后,，于超凈工作臺中，緩緩地向培養(yǎng)皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培養(yǎng)液少量,，以使組織塊浸沒在培養(yǎng)液中,。

（7）輕輕地將培養(yǎng)皿及組織塊移至CO2 培養(yǎng)箱， 如無特殊情況,，不必觀察,。1~2 周后，可觀察到細胞從組織塊邊緣長出,，形成生長暈,。

（9） 一般說來，若培養(yǎng)液無明顯改變,， 1 周換液1 次即可,。待細胞長滿整個培養(yǎng)皿內(nèi)表面，即可進行傳代培養(yǎng),。

兔卵巢表面上皮細胞

細胞基本屬性：

質(zhì)量檢測：細胞角蛋白-19（CK-19）免疫熒光染色為陽性，純度高于 90%,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等

產(chǎn)品規(guī)格：5x105cells/T25或1mL凍存管

培養(yǎng)基：兔卵巢表面上皮細胞培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%

產(chǎn)品貨期現(xiàn)貨,，1周左右

運輸方式T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應(yīng)限制僅限于科學(xué)研究,，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

背景介紹：

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白(β-Cat)ELISA試劑盒 ，英文名： β-Cat ELISA Kit

大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/GelatinaseA)ELISA檢測試劑盒Ratmaixmetalloproteinase2/GelatinaseA,MMP-2ELISAkit 96T/48T

人P27蛋白(P27)免疫試劑盒 Human P27 protein ELISA Kit

英文名稱MousesE-selectin[CD-62E]ELISAKit小鼠可溶性E-選擇素(sE-selectin[CD-62E])規(guī)格：96T/48T

胞漿S轉(zhuǎn)移酶(GSHST)活性比色法定量檢測試劑盒20次

RabbitThromboxaneB2,TX-B2ELISA試劑盒兔血栓素B2(TXB2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

豬Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human single sanded DNA aibody / denatured DNA aibody (ssDNA) ELISA Kit 人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒

PorcineIerferonγ,IFN-γELISAKit 豬γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforAg-NORs(HumanArgyrophilicnucleolarorganizerregionproteins)ELISAKit人核仁形成區(qū)嗜銀蛋白規(guī)格：48T/96T

血液乳酸脫氫酶(LDH)總活性酶動力比色法定量檢測試劑盒20次

MouseansformingGrowthfactorβ1,TGF-β1ELISAKit小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔卵巢表面上皮細胞植物血凝素（PHA）ELISAKit   ELISA.   96T/48T

植物生長激素（GH）ELISAKit   ELISA.   96T/48T

植物凝脂酸（PA）ELISAKit   ELISA.   96T/48T

植物吲哚乙酸（IAA）ELISAKit   ELISA.   96T/48T

操作方法：

組織塊直接培養(yǎng)法（原代細胞培養(yǎng)實驗）

材料與儀器

【動物】選擇大約一半足孕時間的胚胎,，10－13天齡胚胎含有最大數(shù)量的未分化的間質(zhì)細胞,，成纖維細胞可從這些細胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個【實驗材料】每組的超凈臺中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶,；8ml小牛血清（FCS)1瓶,；100ml 0.25%瓶；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個,；3,、50ml離心筒2個4、滅菌培養(yǎng)皿1個,，細胞培養(yǎng)瓶1個5,、1ml，200μl移液器各1支,；槍頭盒2個,；無菌玻璃攪拌棒1個6、細胞計數(shù)板1塊,；7,、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把,；8,、酒精燈1臺；

步驟

1) 胚胎的分離,。適用哺乳動物(倉鼠,、小鼠和大鼠)2)將1－2個胚胎轉(zhuǎn)移至一個小的無菌培養(yǎng)皿中，用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎,，用PBS漂洗,。3)在無菌狀態(tài)下,，將絞碎的胚胎轉(zhuǎn)移于一50ml的無菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無菌,用攪拌棒輕輕攪動,。4)在溫暖的環(huán)境中或置于37°C培養(yǎng)箱中輕輕搖動15分鐘,。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細胞的液體轉(zhuǎn)移至一無菌50ml的離心管中,，該管內(nèi)按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,,。6)加人新鮮溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中,，重復(fù)步驟4和5,。7)離心混合的細胞懸液,，1200r/rain，5分鐘,，棄上清,。8)用新鮮的無菌PBS重懸沉淀的細胞,，按步驟7再次離心。9)用PBS反復(fù)洗滌細胞直至上清清亮為止,。