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原代細(xì)胞的分離培養(yǎng)：

原代培養(yǎng)即直接從有機(jī)體取下細(xì)胞,、組織或器官,，讓它們?cè)隗w外維持與生長(zhǎng)。原代培養(yǎng)的特點(diǎn)是細(xì)胞或組織剛離開機(jī)體，它們的生物性狀尚未發(fā)生很大的改變，在一定程度上可反映它們?cè)隗w內(nèi)的狀態(tài)，表現(xiàn)出來(lái)源組織或細(xì)胞的特性,， 因此用于藥物實(shí)驗(yàn)，尤其是藥物對(duì)細(xì)胞活動(dòng),、結(jié)構(gòu),、代謝、有無(wú)毒性或殺傷作用等,，是的工具,。常用的原代培養(yǎng)法有組織塊培養(yǎng)法和消化培養(yǎng)法,。

（一）組織塊培養(yǎng)法

許多實(shí)驗(yàn)室喜歡用組織塊培養(yǎng)法進(jìn)行原代培養(yǎng)，因?yàn)榉椒ê?jiǎn)單,，細(xì)胞也較容易生長(zhǎng),。尤其是培養(yǎng)心肌，有時(shí)還可觀察到心肌組織塊搏動(dòng),。細(xì)胞從組織塊邊緣向外長(zhǎng)出并鋪滿培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶后,， 即可進(jìn)行傳代。

1. 設(shè)備材料

培養(yǎng)箱,、冰箱,、超凈工作臺(tái)／無(wú)菌間、無(wú)菌吸管,、離心管,、酒精燈、試管架,、培養(yǎng)瓶,、培養(yǎng)皿,、消化液,、基礎(chǔ)培養(yǎng)液、胎牛血清,、Hanks 溶液,、雙抗試液、剪刀,、攝子,、小燒杯。

2. 操作步驟

（1） 在無(wú)菌條件下,，取待培養(yǎng)的組織適量,，置入小燒杯中， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次,，去掉組織塊表面的血污,。

（2）用眼科剪將組織塊反復(fù)剪成0.5~ 1mm3的小塊。

（3）再用Hanks 溶液反復(fù)漂洗,， 直至液體不混濁為止,。等組織塊下沉，將燒杯傾斜,，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液,。

（4）用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml、200μg/ml）的培養(yǎng)液再清洗,，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養(yǎng)液,。

（5）用彎頭吸管吸取組織小塊,，均勻地置于培養(yǎng)皿內(nèi)表面，吸去多余的培養(yǎng)液,，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜,。蓋好培養(yǎng)皿蓋，做好標(biāo)記,， 置37°C 的CO2培養(yǎng)箱內(nèi),。

（6） 2~4h 后，于超凈工作臺(tái)中,，緩緩地向培養(yǎng)皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培養(yǎng)液少量,，以使組織塊浸沒在培養(yǎng)液中。

（7）輕輕地將培養(yǎng)皿及組織塊移至CO2 培養(yǎng)箱,， 如無(wú)特殊情況,，不必觀察。1~2 周后,，可觀察到細(xì)胞從組織塊邊緣長(zhǎng)出,，形成生長(zhǎng)暈。

（9） 一般說(shuō)來(lái),，若培養(yǎng)液無(wú)明顯改變,， 1 周換液1 次即可。待細(xì)胞長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)表面,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

兔骨髓中性粒細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞鑒定：CD11b/Integrin alpha M+、CD15+,、CD45+或CD18+免疫熒光染色為陽(yáng)性,，細(xì)胞純度高于90%

支原體檢測(cè)：兔骨髓中性粒細(xì)胞不含有 HIV-1、 HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25或1mL凍存管

培養(yǎng)基：兔骨髓中性粒細(xì)胞專用培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳,；溫度：37℃

凍存條件：無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

細(xì)胞代數(shù)：第1代

產(chǎn)品貨期現(xiàn)貨,，1周左右

運(yùn)輸方式T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應(yīng)限制僅限于科學(xué)研究,，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

背景介紹：

公司正在出售的產(chǎn)品：

鋅指蛋白800抗體

細(xì)胞二胺氧化酶（DAO）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞甲基化組蛋白H3-K4染色質(zhì)免疫沉淀分析（CHIP）試劑盒

細(xì)胞HHV6-B（HUMAN HERPESVIRUS 6-B）病毒定性檢測(cè)試劑盒

石蠟切片組織NF KAPPA B P65蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒

通用型脯（proline）含量比色法定量檢測(cè)試劑盒

冰凍切片組織L（CATHEPSIN L）活性原位熒光染色檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞TIE2激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）

羅丹明123簡(jiǎn)易細(xì)胞核外形態(tài)染色試劑盒

冰凍切片結(jié)締組織（CONNECTIVE TISSUE）格莫瑞（Gomori）染色試劑盒

細(xì)胞磷脂酶D（Phospholipase D）總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒

酵母銅ATP酶（Cu＋＋ －ATPase）活性比色法量檢測(cè)試劑盒

水中大腸菌群（coliform）基因熒光定量檢測(cè)試劑盒

載玻片細(xì)胞IP3R受體蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒

組織基質(zhì)金屬（MMP-1）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒

動(dòng)物肺組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒

早期胎盤胰島素樣肽INSL4抗體

鈣粘附蛋白-11抗體

驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員C1抗體

Kartagener綜合征相關(guān)蛋白RSHL3抗體

細(xì)胞結(jié)合蛋白抗體

ZCCHC2蛋白抗體

跨膜蛋白Sema3C抗體

兔骨髓中性粒細(xì)胞APC標(biāo)記小鼠CD38單克隆抗體

操作方法：

組織塊直接培養(yǎng)法（原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)）

材料與儀器

【動(dòng)物】選擇大約一半足孕時(shí)間的胚胎,，10－13天齡胚胎含有最大數(shù)量的未分化的間質(zhì)細(xì)胞，成纖維細(xì)胞可從這些細(xì)胞衍生獲得,。每組小鼠胚胎1個(gè)【實(shí)驗(yàn)材料】每組的超凈臺(tái)中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶,；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶,；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個(gè),；3、50ml離心筒2個(gè)4,、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè),，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)5、1ml,，200μl移液器各1支,；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)6,、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；7,、滅好菌的鑷子1把,，剪刀1把；8,、酒精燈1臺(tái),；

步驟

1) 胚胎的分離。適用哺乳動(dòng)物(倉(cāng)鼠,、小鼠和大鼠)2)將1－2個(gè)胚胎轉(zhuǎn)移至一個(gè)小的無(wú)菌培養(yǎng)皿中,，用新的無(wú)菌剪刀小心地絞碎胚胎，用PBS漂洗,。3)在無(wú)菌狀態(tài)下,，將絞碎的胚胎轉(zhuǎn)移于一50ml的無(wú)菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無(wú)菌,用攪拌棒輕輕攪動(dòng)。4)在溫暖的環(huán)境中或置于37°C培養(yǎng)箱中輕輕搖動(dòng)15分鐘,。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降,，將含有懸浮細(xì)胞的液體轉(zhuǎn)移至一無(wú)菌50ml的離心管中,，該管內(nèi)按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。6)加人新鮮溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來(lái)的50ml離心筒中,，重復(fù)步驟4和5,。7)離心混合的細(xì)胞懸液，1200r/rain,，5分鐘,，棄上清。8)用新鮮的無(wú)菌PBS重懸沉淀的細(xì)胞,，按步驟7再次離心,。9)用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞直至上清清亮為止。