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小鼠小腸成纖維細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

質(zhì)量檢測：纖維連接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽性,，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV,、HCV、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等

產(chǎn)品規(guī)格：5x105cells/T25或1mL凍存管

培養(yǎng)基：小鼠小腸成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%

產(chǎn)品貨期現(xiàn)貨,，1周左右

運(yùn)輸方式T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應(yīng)限制僅限于科學(xué)研究,，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

背景介紹：

原代細(xì)胞的分離培養(yǎng)：

原代培養(yǎng)即直接從有機(jī)體取下細(xì)胞、組織或器官，讓它們?cè)隗w外維持與生長,。原代培養(yǎng)的特點(diǎn)是細(xì)胞或組織剛離開機(jī)體,，它們的生物性狀尚未發(fā)生很大的改變，在一定程度上可反映它們?cè)隗w內(nèi)的狀態(tài),，表現(xiàn)出來源組織或細(xì)胞的特性,， 因此用于藥物實(shí)驗(yàn)，尤其是藥物對(duì)細(xì)胞活動(dòng),、結(jié)構(gòu),、代謝、有無毒性或殺傷作用等,，是的工具,。常用的原代培養(yǎng)法有組織塊培養(yǎng)法和消化培養(yǎng)法。

（一）組織塊培養(yǎng)法

許多實(shí)驗(yàn)室喜歡用組織塊培養(yǎng)法進(jìn)行原代培養(yǎng),，因?yàn)榉椒ê唵?，?xì)胞也較容易生長。尤其是培養(yǎng)心肌,，有時(shí)還可觀察到心肌組織塊搏動(dòng),。細(xì)胞從組織塊邊緣向外長出并鋪滿培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶后， 即可進(jìn)行傳代,。

1. 設(shè)備材料

培養(yǎng)箱,、冰箱、超凈工作臺(tái)／無菌間,、無菌吸管,、離心管、酒精燈,、試管架,、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿,、消化液,、基礎(chǔ)培養(yǎng)液、胎牛血清,、Hanks 溶液,、雙抗試液、剪刀,、攝子,、小燒杯。

2. 操作步驟

（1） 在無菌條件下,，取待培養(yǎng)的組織適量,，置入小燒杯中,， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉組織塊表面的血污,。

（2）用眼科剪將組織塊反復(fù)剪成0.5~ 1mm3的小塊,。

（3）再用Hanks 溶液反復(fù)漂洗， 直至液體不混濁為止,。等組織塊下沉,，將燒杯傾斜，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液,。

（4）用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml,、200μg/ml）的培養(yǎng)液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養(yǎng)液,。

（5）用彎頭吸管吸取組織小塊，均勻地置于培養(yǎng)皿內(nèi)表面,，吸去多余的培養(yǎng)液,，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜。蓋好培養(yǎng)皿蓋,，做好標(biāo)記,， 置37°C 的CO2培養(yǎng)箱內(nèi)。

（6） 2~4h 后,，于超凈工作臺(tái)中,，緩緩地向培養(yǎng)皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培養(yǎng)液少量，以使組織塊浸沒在培養(yǎng)液中,。

（7）輕輕地將培養(yǎng)皿及組織塊移至CO2 培養(yǎng)箱,， 如無特殊情況，不必觀察,。1~2 周后,，可觀察到細(xì)胞從組織塊邊緣長出，形成生長暈,。

（9） 一般說來,，若培養(yǎng)液無明顯改變， 1 周換液1 次即可,。待細(xì)胞長滿整個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)表面,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

操作方法：

組織塊直接培養(yǎng)法（原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)）

材料與儀器

【動(dòng)物】選擇大約一半足孕時(shí)間的胚胎,，10－13天齡胚胎含有最大數(shù)量的未分化的間質(zhì)細(xì)胞,，成纖維細(xì)胞可從這些細(xì)胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個(gè)【實(shí)驗(yàn)材料】每組的超凈臺(tái)中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶,；8ml小牛血清（FCS)1瓶,；100ml 0.25%瓶,；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個(gè)；3,、50ml離心筒2個(gè)4,、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)5,、1ml,，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè),；無菌玻璃攪拌棒1個(gè)6,、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；7,、滅好菌的鑷子1把,，剪刀1把；8,、酒精燈1臺(tái),；

步驟

1) 胚胎的分離。適用哺乳動(dòng)物(倉鼠,、小鼠和大鼠)2)將1－2個(gè)胚胎轉(zhuǎn)移至一個(gè)小的無菌培養(yǎng)皿中,，用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎，用PBS漂洗,。3)在無菌狀態(tài)下,，將絞碎的胚胎轉(zhuǎn)移于一50ml的無菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無菌,用攪拌棒輕輕攪動(dòng)。4)在溫暖的環(huán)境中或置于37°C培養(yǎng)箱中輕輕搖動(dòng)15分鐘,。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降,，將含有懸浮細(xì)胞的液體轉(zhuǎn)移至一無菌50ml的離心管中，該管內(nèi)按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,,。6)加人新鮮溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中,，重復(fù)步驟4和5。7)離心混合的細(xì)胞懸液,，1200r/rain,，5分鐘，棄上清,。8)用新鮮的無菌PBS重懸沉淀的細(xì)胞,，按步驟7再次離心。9)用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞直至上清清亮為止,。

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