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原代細(xì)胞的分離培養(yǎng)：

原代培養(yǎng)即直接從有機體取下細(xì)胞,、組織或器官，讓它們在體外維持與生長,。原代培養(yǎng)的特點是細(xì)胞或組織剛離開機體,，它們的生物性狀尚未發(fā)生很大的改變，在一定程度上可反映它們在體內(nèi)的狀態(tài),，表現(xiàn)出來源組織或細(xì)胞的特性,， 因此用于藥物實驗，尤其是藥物對細(xì)胞活動,、結(jié)構(gòu),、代謝、有無毒性或殺傷作用等,，是的工具,。常用的原代培養(yǎng)法有組織塊培養(yǎng)法和消化培養(yǎng)法。

（一）組織塊培養(yǎng)法

許多實驗室喜歡用組織塊培養(yǎng)法進行原代培養(yǎng)，因為方法簡單,，細(xì)胞也較容易生長,。尤其是培養(yǎng)心肌，有時還可觀察到心肌組織塊搏動,。細(xì)胞從組織塊邊緣向外長出并鋪滿培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶后,， 即可進行傳代。

1. 設(shè)備材料

培養(yǎng)箱,、冰箱,、超凈工作臺／無菌間、無菌吸管,、離心管,、酒精燈、試管架,、培養(yǎng)瓶,、培養(yǎng)皿、消化液,、基礎(chǔ)培養(yǎng)液,、胎牛血清、Hanks 溶液,、雙抗試液,、剪刀、攝子,、小燒杯,。

2. 操作步驟

（1） 在無菌條件下，取待培養(yǎng)的組織適量,，置入小燒杯中,， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉組織塊表面的血污,。

（2）用眼科剪將組織塊反復(fù)剪成0.5~ 1mm3的小塊,。

（3）再用Hanks 溶液反復(fù)漂洗， 直至液體不混濁為止,。等組織塊下沉,，將燒杯傾斜，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液,。

（4）用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml,、200μg/ml）的培養(yǎng)液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養(yǎng)液,。

（5）用彎頭吸管吸取組織小塊,，均勻地置于培養(yǎng)皿內(nèi)表面,，吸去多余的培養(yǎng)液，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜,。蓋好培養(yǎng)皿蓋,，做好標(biāo)記， 置37°C 的CO2培養(yǎng)箱內(nèi),。

（6） 2~4h 后,，于超凈工作臺中，緩緩地向培養(yǎng)皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培養(yǎng)液少量,，以使組織塊浸沒在培養(yǎng)液中,。

（7）輕輕地將培養(yǎng)皿及組織塊移至CO2 培養(yǎng)箱， 如無特殊情況,，不必觀察,。1~2 周后，可觀察到細(xì)胞從組織塊邊緣長出,，形成生長暈,。

（9） 一般說來，若培養(yǎng)液無明顯改變,， 1 周換液1 次即可,。待細(xì)胞長滿整個培養(yǎng)皿內(nèi)表面,，即可進行傳代培養(yǎng),。

小鼠外周血中性粒細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

質(zhì)量檢測：小鼠外周血中性粒細(xì)胞純度高于 90%，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等

產(chǎn)品規(guī)格：5x105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基：小鼠外周血中性粒細(xì)胞專用培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%

產(chǎn)品貨期現(xiàn)貨,，1周左右

運輸方式T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應(yīng)限制僅限于科學(xué)研究,，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

背景介紹：

公司正在出售的產(chǎn)品：

體外非細(xì)胞系統(tǒng)

赫特法病毒DNA純化試劑盒

LAMBDA噬菌體培養(yǎng)試劑盒

載玻片細(xì)胞FSH-BETA蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒

通用型豬圓環(huán)病毒（CIRCOVIRUS）基因檢測試劑盒

血清/血漿總汁酸酶循環(huán)比色法定量檢測試劑盒

細(xì)胞5－焦磷酸甲羥戊酸脫羧酶（mevalonate 5-pyrophosphate decarboxylase）活性比色法定量檢測試劑盒

脂質(zhì)過氧化物4-羥基壬烯醛（4－HNE）ELISA定量測定試劑盒

全組織溶酶體脂酶（酸性脂酶）活性染色試劑盒

腸胃活檢螺旋桿菌（H. PYLORI）瓦辛斯泰雷（Warthin Starry）銀染試劑盒

PAR-1蛋白免疫共沉淀分析試劑盒

食物D-糖酸鹽比色法定量檢測試劑盒

組織氯乙?；D(zhuǎn)移酶（CAT）報告基因活性同位素定量檢測試劑盒

細(xì)胞B-RAF激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）

動物細(xì)胞高純內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒

整合素相關(guān)蛋白CD47

干細(xì)胞生長因子抗體

人k輕鏈單克隆抗體

LCK相互作用膜蛋白抗體

細(xì)胞色素P450 2J3抗體

γ1氨基丁酸受體α5/GABRα5抗體

離子通道蛋白Kv4.3抗體

小鼠外周血中性粒細(xì)胞Bcr抗體

操作方法：

組織塊直接培養(yǎng)法（原代細(xì)胞培養(yǎng)實驗）

材料與儀器

【動物】選擇大約一半足孕時間的胚胎,，10－13天齡胚胎含有最大數(shù)量的未分化的間質(zhì)細(xì)胞，成纖維細(xì)胞可從這些細(xì)胞衍生獲得,。每組小鼠胚胎1個【實驗材料】每組的超凈臺中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶,；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶,；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個,；3、50ml離心筒2個4,、滅菌培養(yǎng)皿1個,，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個5、1ml,，200μl移液器各1支,；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個6,、細(xì)胞計數(shù)板1塊,；7、滅好菌的鑷子1把,，剪刀1把,；8、酒精燈1臺,；

步驟

1) 胚胎的分離,。適用哺乳動物(倉鼠、小鼠和大鼠)2)將1－2個胚胎轉(zhuǎn)移至一個小的無菌培養(yǎng)皿中,，用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎,，用PBS漂洗。3)在無菌狀態(tài)下,，將絞碎的胚胎轉(zhuǎn)移于一50ml的無菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無菌,用攪拌棒輕輕攪動,。4)在溫暖的環(huán)境中或置于37°C培養(yǎng)箱中輕輕搖動15分鐘。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降,，將含有懸浮細(xì)胞的液體轉(zhuǎn)移至一無菌50ml的離心管中,，該管內(nèi)按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。6)加人新鮮溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中,，重復(fù)步驟4和5,。7)離心混合的細(xì)胞懸液,，1200r/rain，5分鐘,，棄上清,。8)用新鮮的無菌PBS重懸沉淀的細(xì)胞，按步驟7再次離心,。9)用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞直至上清清亮為止,。