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原代細(xì)胞的分離培養(yǎng)：

原代培養(yǎng)即直接從有機體取下細(xì)胞,、組織或器官,，讓它們在體外維持與生長,。原代培養(yǎng)的特點是細(xì)胞或組織剛離開機體,，它們的生物性狀尚未發(fā)生很大的改變，在一定程度上可反映它們在體內(nèi)的狀態(tài),，表現(xiàn)出來源組織或細(xì)胞的特性， 因此用于藥物實驗,，尤其是藥物對細(xì)胞活動、結(jié)構(gòu),、代謝,、有無毒性或殺傷作用等，是的工具,。常用的原代培養(yǎng)法有組織塊培養(yǎng)法和消化培養(yǎng)法,。

（一）組織塊培養(yǎng)法

許多實驗室喜歡用組織塊培養(yǎng)法進行原代培養(yǎng)，因為方法簡單,，細(xì)胞也較容易生長,。尤其是培養(yǎng)心肌，有時還可觀察到心肌組織塊搏動,。細(xì)胞從組織塊邊緣向外長出并鋪滿培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶后,， 即可進行傳代。

1. 設(shè)備材料

培養(yǎng)箱,、冰箱,、超凈工作臺／無菌間、無菌吸管,、離心管,、酒精燈、試管架,、培養(yǎng)瓶,、培養(yǎng)皿、消化液,、基礎(chǔ)培養(yǎng)液,、胎牛血清、Hanks 溶液,、雙抗試液,、剪刀、攝子,、小燒杯,。

2. 操作步驟

（1） 在無菌條件下，取待培養(yǎng)的組織適量,，置入小燒杯中,， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉組織塊表面的血污,。

（2）用眼科剪將組織塊反復(fù)剪成0.5~ 1mm3的小塊,。

（3）再用Hanks 溶液反復(fù)漂洗， 直至液體不混濁為止,。等組織塊下沉,，將燒杯傾斜,，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液。

（4）用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml,、200μg/ml）的培養(yǎng)液再清洗,，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養(yǎng)液。

（5）用彎頭吸管吸取組織小塊,，均勻地置于培養(yǎng)皿內(nèi)表面,，吸去多余的培養(yǎng)液，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜,。蓋好培養(yǎng)皿蓋,，做好標(biāo)記， 置37°C 的CO2培養(yǎng)箱內(nèi),。

（6） 2~4h 后,，于超凈工作臺中，緩緩地向培養(yǎng)皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培養(yǎng)液少量,，以使組織塊浸沒在培養(yǎng)液中,。

（7）輕輕地將培養(yǎng)皿及組織塊移至CO2 培養(yǎng)箱， 如無特殊情況,，不必觀察,。1~2 周后，可觀察到細(xì)胞從組織塊邊緣長出,，形成生長暈。

（9） 一般說來,，若培養(yǎng)液無明顯改變,， 1 周換液1 次即可。待細(xì)胞長滿整個培養(yǎng)皿內(nèi)表面,，即可進行傳代培養(yǎng),。

小鼠脾臟中性粒細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞鑒定：CD11b/Integrin alpha M+、CD15+,、CD45+或CD18+免疫熒光染色為陽性,，細(xì)胞純度高于90%

支原體檢測：小鼠脾臟中性粒細(xì)胞不含有 HIV-1、 HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25或1mL凍存管

培養(yǎng)基：小鼠脾臟中性粒細(xì)胞專用培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳,；溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

細(xì)胞代數(shù)：第1代

產(chǎn)品貨期現(xiàn)貨,，1周左右

運輸方式T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應(yīng)限制僅限于科學(xué)研究,，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

背景介紹：

公司正在出售的產(chǎn)品：

抗體

組織醛縮酶（ADOLASE）活性比色法定量檢測試劑盒

HHV病毒DNA純化試劑盒

LAMBDA噬菌體DNA樹脂純化試劑盒

冰凍切片組織FSH-BETA蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒

通用型豬布病基因檢測試劑盒

血液二氧化碳（CO2）濃度酶偶聯(lián)反應(yīng)比色法定量檢測試劑盒

組織異戊二烯焦磷酸異構(gòu)酶（isopentenyl pyrophosphate isomerase）活性比色法定量檢測試劑盒

冰凍切片脂質(zhì)過氧化物異構(gòu)前列（ISOPROSTANE）熒光染色試劑盒

細(xì)胞琥珀酸脫氫酶活性染色試劑盒

細(xì)菌耐酸（ACID-FAST）染色試劑盒

冰凍切片組織PAR-2蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒

飲料D-糖酸內(nèi)脂比色法定量檢測試劑盒

組織氯乙?；D(zhuǎn)移酶（CAT）報告基因活性熒光定量檢測試劑盒

細(xì)胞CaM KII激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）

動物組織肌質(zhì)網(wǎng)粗提分離試劑盒

整合素樣金屬與13型抗體

高表達神經(jīng)上皮蛋白BTG3抗體

人β亞基人絨毛膜(β HCG)抗體

LENG1蛋白抗體

細(xì)胞色素P450 2W1抗體

γ-氨基丁酸A受體相關(guān)膜蛋白3

離子轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白SLC7A9抗體

小鼠脾臟中性粒細(xì)胞BEN結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體

操作方法：

組織塊直接培養(yǎng)法（原代細(xì)胞培養(yǎng)實驗）

材料與儀器

【動物】選擇大約一半足孕時間的胚胎，10－13天齡胚胎含有最大數(shù)量的未分化的間質(zhì)細(xì)胞,，成纖維細(xì)胞可從這些細(xì)胞衍生獲得,。每組小鼠胚胎1個【實驗材料】每組的超凈臺中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶,；100ml 0.25%瓶,；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個；3,、50ml離心筒2個4,、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個5,、1ml,，200μl移液器各1支；槍頭盒2個,；無菌玻璃攪拌棒1個6,、細(xì)胞計數(shù)板1塊；7,、滅好菌的鑷子1把,，剪刀1把；8,、酒精燈1臺,；

步驟

1) 胚胎的分離。適用哺乳動物(倉鼠、小鼠和大鼠)2)將1－2個胚胎轉(zhuǎn)移至一個小的無菌培養(yǎng)皿中,，用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎,，用PBS漂洗。3)在無菌狀態(tài)下,，將絞碎的胚胎轉(zhuǎn)移于一50ml的無菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無菌,用攪拌棒輕輕攪動,。4)在溫暖的環(huán)境中或置于37°C培養(yǎng)箱中輕輕搖動15分鐘。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降,，將含有懸浮細(xì)胞的液體轉(zhuǎn)移至一無菌50ml的離心管中,，該管內(nèi)按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。6)加人新鮮溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中,，重復(fù)步驟4和5,。7)離心混合的細(xì)胞懸液，1200r/rain,，5分鐘,，棄上清。8)用新鮮的無菌PBS重懸沉淀的細(xì)胞,，按步驟7再次離心,。9)用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞直至上清清亮為止。