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小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSC）

細(xì)胞基本屬性：

質(zhì)量檢測(cè)：CD44免疫熒光染色為陽(yáng)性,，CD45免疫熒光染色為陰性,，純度高于 90%,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等

產(chǎn)品規(guī)格：5x105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基：小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%

產(chǎn)品貨期現(xiàn)貨,，1周左右

運(yùn)輸方式T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應(yīng)限制僅限于科學(xué)研究,，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

背景介紹：

原代細(xì)胞的分離培養(yǎng)：

原代培養(yǎng)即直接從有機(jī)體取下細(xì)胞,、組織或器官，讓它們?cè)隗w外維持與生長(zhǎng),。原代培養(yǎng)的特點(diǎn)是細(xì)胞或組織剛離開(kāi)機(jī)體，它們的生物性狀尚未發(fā)生很大的改變,，在一定程度上可反映它們?cè)隗w內(nèi)的狀態(tài),，表現(xiàn)出來(lái)源組織或細(xì)胞的特性， 因此用于藥物實(shí)驗(yàn),，尤其是藥物對(duì)細(xì)胞活動(dòng),、結(jié)構(gòu)、代謝,、有無(wú)毒性或殺傷作用等,，是的工具,。常用的原代培養(yǎng)法有組織塊培養(yǎng)法和消化培養(yǎng)法。

（一）組織塊培養(yǎng)法

許多實(shí)驗(yàn)室喜歡用組織塊培養(yǎng)法進(jìn)行原代培養(yǎng),，因?yàn)榉椒ê?jiǎn)單,，細(xì)胞也較容易生長(zhǎng)。尤其是培養(yǎng)心肌,，有時(shí)還可觀察到心肌組織塊搏動(dòng),。細(xì)胞從組織塊邊緣向外長(zhǎng)出并鋪滿培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶后， 即可進(jìn)行傳代,。

1. 設(shè)備材料

培養(yǎng)箱,、冰箱、超凈工作臺(tái)／無(wú)菌間,、無(wú)菌吸管,、離心管、酒精燈,、試管架,、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿,、消化液,、基礎(chǔ)培養(yǎng)液、胎牛血清,、Hanks 溶液,、雙抗試液、剪刀,、攝子,、小燒杯。

2. 操作步驟

（1） 在無(wú)菌條件下,，取待培養(yǎng)的組織適量,，置入小燒杯中， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次,，去掉組織塊表面的血污,。

（2）用眼科剪將組織塊反復(fù)剪成0.5~ 1mm3的小塊。

（3）再用Hanks 溶液反復(fù)漂洗,， 直至液體不混濁為止,。等組織塊下沉，將燒杯傾斜,，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液,。

（4）用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml、200μg/ml）的培養(yǎng)液再清洗,，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養(yǎng)液,。

（5）用彎頭吸管吸取組織小塊,，均勻地置于培養(yǎng)皿內(nèi)表面，吸去多余的培養(yǎng)液,，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜,。蓋好培養(yǎng)皿蓋，做好標(biāo)記,， 置37°C 的CO2培養(yǎng)箱內(nèi),。

（6） 2~4h 后，于超凈工作臺(tái)中,，緩緩地向培養(yǎng)皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培養(yǎng)液少量,，以使組織塊浸沒(méi)在培養(yǎng)液中。

（7）輕輕地將培養(yǎng)皿及組織塊移至CO2 培養(yǎng)箱,， 如無(wú)特殊情況,，不必觀察。1~2 周后,，可觀察到細(xì)胞從組織塊邊緣長(zhǎng)出,，形成生長(zhǎng)暈。

（9） 一般說(shuō)來(lái),，若培養(yǎng)液無(wú)明顯改變,， 1 周換液1 次即可。待細(xì)胞長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)表面,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

操作方法：

組織塊直接培養(yǎng)法（原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)）

材料與儀器

【動(dòng)物】選擇大約一半足孕時(shí)間的胚胎，10－13天齡胚胎含有最大數(shù)量的未分化的間質(zhì)細(xì)胞,，成纖維細(xì)胞可從這些細(xì)胞衍生獲得,。每組小鼠胚胎1個(gè)【實(shí)驗(yàn)材料】每組的超凈臺(tái)中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶,；100ml 0.25%瓶,；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個(gè)；3,、50ml離心筒2個(gè)4,、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)5,、1ml,，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè),；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊,；7,、滅好菌的鑷子1把,，剪刀1把；8,、酒精燈1臺(tái),；

步驟

1) 胚胎的分離。適用哺乳動(dòng)物(倉(cāng)鼠,、小鼠和大鼠)2)將1－2個(gè)胚胎轉(zhuǎn)移至一個(gè)小的無(wú)菌培養(yǎng)皿中,，用新的無(wú)菌剪刀小心地絞碎胚胎，用PBS漂洗,。3)在無(wú)菌狀態(tài)下,，將絞碎的胚胎轉(zhuǎn)移于一50ml的無(wú)菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無(wú)菌,用攪拌棒輕輕攪動(dòng)。4)在溫暖的環(huán)境中或置于37°C培養(yǎng)箱中輕輕搖動(dòng)15分鐘,。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降,，將含有懸浮細(xì)胞的液體轉(zhuǎn)移至一無(wú)菌50ml的離心管中，該管內(nèi)按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,,。6)加人新鮮溶液(見(jiàn)前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來(lái)的50ml離心筒中,，重復(fù)步驟4和5。7)離心混合的細(xì)胞懸液,，1200r/rain,，5分鐘，棄上清,。8)用新鮮的無(wú)菌PBS重懸沉淀的細(xì)胞,，按步驟7再次離心。9)用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞直至上清清亮為止,。

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