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原代細(xì)胞的分離培養(yǎng)：

原代培養(yǎng)即直接從有機(jī)體取下細(xì)胞,、組織或器官，讓它們在體外維持與生長,。原代培養(yǎng)的特點(diǎn)是細(xì)胞或組織剛離開機(jī)體,，它們的生物性狀尚未發(fā)生很大的改變，在一定程度上可反映它們在體內(nèi)的狀態(tài),，表現(xiàn)出來源組織或細(xì)胞的特性,， 因此用于藥物實(shí)驗(yàn)，尤其是藥物對細(xì)胞活動,、結(jié)構(gòu),、代謝、有無毒性或殺傷作用等,，是的工具,。常用的原代培養(yǎng)法有組織塊培養(yǎng)法和消化培養(yǎng)法。

（一）組織塊培養(yǎng)法

許多實(shí)驗(yàn)室喜歡用組織塊培養(yǎng)法進(jìn)行原代培養(yǎng),，因?yàn)榉椒ê唵?，?xì)胞也較容易生長。尤其是培養(yǎng)心肌,，有時還可觀察到心肌組織塊搏動,。細(xì)胞從組織塊邊緣向外長出并鋪滿培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶后， 即可進(jìn)行傳代,。

1. 設(shè)備材料

培養(yǎng)箱,、冰箱、超凈工作臺／無菌間,、無菌吸管,、離心管、酒精燈,、試管架,、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿,、消化液,、基礎(chǔ)培養(yǎng)液,、胎牛血清,、Hanks 溶液、雙抗試液,、剪刀,、攝子,、小燒杯。

2. 操作步驟

（1） 在無菌條件下,，取待培養(yǎng)的組織適量,，置入小燒杯中， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次,，去掉組織塊表面的血污,。

（2）用眼科剪將組織塊反復(fù)剪成0.5~ 1mm3的小塊。

（3）再用Hanks 溶液反復(fù)漂洗,， 直至液體不混濁為止,。等組織塊下沉，將燒杯傾斜,，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液,。

（4）用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml、200μg/ml）的培養(yǎng)液再清洗,，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養(yǎng)液,。

（5）用彎頭吸管吸取組織小塊，均勻地置于培養(yǎng)皿內(nèi)表面,，吸去多余的培養(yǎng)液,，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜。蓋好培養(yǎng)皿蓋,，做好標(biāo)記,， 置37°C 的CO2培養(yǎng)箱內(nèi)。

（6） 2~4h 后,，于超凈工作臺中,，緩緩地向培養(yǎng)皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培養(yǎng)液少量，以使組織塊浸沒在培養(yǎng)液中,。

（7）輕輕地將培養(yǎng)皿及組織塊移至CO2 培養(yǎng)箱,， 如無特殊情況，不必觀察,。1~2 周后,，可觀察到細(xì)胞從組織塊邊緣長出，形成生長暈,。

（9） 一般說來,，若培養(yǎng)液無明顯改變， 1 周換液1 次即可,。待細(xì)胞長滿整個培養(yǎng)皿內(nèi)表面,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

大鼠滑膜成纖維細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

質(zhì)量檢測：波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽性，純度高于 90%,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等

產(chǎn)品規(guī)格：5x105cells/T25或1mL凍存管

培養(yǎng)基：大鼠滑膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳,；溫度：37℃

換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%

 產(chǎn)品貨期現(xiàn)貨,，1周左右

運(yùn)輸方式T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應(yīng)限制僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

背景介紹：

公司正在出售的產(chǎn)品：

血管緊張素Ⅱ受體1抗體

體液組織L（CATHEPSIN L）活性熒光定量檢測試劑盒

組蛋白H3-K122（mono）甲基化檢測試劑盒

純化人體RUNX3基因重組表達(dá)載體（pcDNA-RUNX3）

石蠟切片組織MAPK蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒

待測樣品處理試劑盒

人體體液正鐵白蛋白（methemalbumin）含量比色法定量檢測試劑盒

飲料鎂離子濃度酶反應(yīng)光譜法定量檢測試劑盒

組織因子（TISSUE FACTOR）活性比色法定量檢測試劑盒

組織甘肽過氧化物酶（GSH PX）活性比色法定量檢測試劑盒

質(zhì)粒/蛋白制備樣品內(nèi)毒素濁度法定量檢測試劑盒

石蠟切片組織CASPASE-1蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒

蘑菇海藻糖比色法定量檢測試劑盒

組蛋白H3-K64乙?；瘷z測試劑盒

組織PKG-Iβ激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）

植物釋放凋亡檢測試劑盒

中心體蛋白104抗體

谷脫羧酶-65單克隆抗體

溶質(zhì)載體家族13成員2抗體

MATH5蛋白抗體

細(xì)胞周期蛋白N端結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體

八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子6抗體

磷酸化Bax抗體

大鼠滑膜成纖維細(xì)胞CD209b抗體

操作方法：

組織塊直接培養(yǎng)法（原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)）

材料與儀器

【動物】選擇大約一半足孕時間的胚胎，10－13天齡胚胎含有最大數(shù)量的未分化的間質(zhì)細(xì)胞,，成纖維細(xì)胞可從這些細(xì)胞衍生獲得,。每組小鼠胚胎1個【實(shí)驗(yàn)材料】每組的超凈臺中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶,；8ml小牛血清（FCS)1瓶,；100ml 0.25%瓶；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個,；3,、50ml離心筒2個4、滅菌培養(yǎng)皿1個,，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個5,、1ml，200μl移液器各1支,；槍頭盒2個,；無菌玻璃攪拌棒1個6、細(xì)胞計數(shù)板1塊,；7,、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把,；8,、酒精燈1臺；

步驟

1) 胚胎的分離,。適用哺乳動物(倉鼠,、小鼠和大鼠)2)將1－2個胚胎轉(zhuǎn)移至一個小的無菌培養(yǎng)皿中，用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎,，用PBS漂洗,。3)在無菌狀態(tài)下，將絞碎的胚胎轉(zhuǎn)移于一50ml的無菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無菌,用攪拌棒輕輕攪動,。4)在溫暖的環(huán)境中或置于37°C培養(yǎng)箱中輕輕搖動15分鐘,。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細(xì)胞的液體轉(zhuǎn)移至一無菌50ml的離心管中,，該管內(nèi)按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,,。6)加人新鮮溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中，重復(fù)步驟4和5,。7)離心混合的細(xì)胞懸液,，1200r/rain，5分鐘,，棄上清,。8)用新鮮的無菌PBS重懸沉淀的細(xì)胞,，按步驟7再次離心。9)用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞直至上清清亮為止,。