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質(zhì)量檢測：廣譜角蛋白(PCK)免疫熒光染色為陽性，純度高于 90%,，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV,、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等

產(chǎn)品規(guī)格：5x105cells/T25或1mL凍存管

培養(yǎng)基：大鼠肝外膽管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳,；溫度：37℃

換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%

 產(chǎn)品貨期現(xiàn)貨,，1周左右

運(yùn)輸方式T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應(yīng)限制僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

收貨處理取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜，放入37℃,、5%CO2，飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)

傳代密度細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)

傳代代數(shù)可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳

傳代比例傳代建議1：2傳代,，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法

1.吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4.待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基,。

1.準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面,，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手,、75%酒精擦拭手至肘部,。

2.布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽,。

3.處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2~3次,，去除血污,；如懷疑組織可能污染,，可先置于含有青的混合液中30~60分鐘,。

4.剪切：用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊,，以便于消化,。加入比組織塊總量多30~50倍的液，然后一并倒入三角燒瓶中,，結(jié)扎瓶口或塞以膠塞。

5.消化：或用恒溫水浴,，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次,，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定,。

6.分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察,，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個細(xì)胞,，立即終止消化,，隨即通過適宜不銹鋼篩,，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500~1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘,，吸出上清,，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7.計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù),，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大,，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中,。對大多數(shù)細(xì)胞來說,，pH要求在7.2~7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色,，如顏色偏黃,，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整,。

8.培養(yǎng)：置于36.5℃溫箱培養(yǎng),，如用CO2溫箱培養(yǎng),，瓶蓋需擰松半圈。

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