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原代細胞的分離培養(yǎng)：

原代培養(yǎng)即直接從有機體取下細胞、組織或器官,，讓它們在體外維持與生長,。原代培養(yǎng)的特點是細胞或組織剛離開機體，它們的生物性狀尚未發(fā)生很大的改變,，在一定程度上可反映它們在體內的狀態(tài),，表現(xiàn)出來源組織或細胞的特性,， 因此用于藥物實驗,，尤其是藥物對細胞活動、結構,、代謝,、有無毒性或殺傷作用等，是的工具,。常用的原代培養(yǎng)法有組織塊培養(yǎng)法和消化培養(yǎng)法,。

（一）組織塊培養(yǎng)法

許多實驗室喜歡用組織塊培養(yǎng)法進行原代培養(yǎng)，因為方法簡單,，細胞也較容易生長,。尤其是培養(yǎng)心肌，有時還可觀察到心肌組織塊搏動,。細胞從組織塊邊緣向外長出并鋪滿培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶后,， 即可進行傳代。

1. 設備材料

培養(yǎng)箱,、冰箱,、超凈工作臺／無菌間、無菌吸管,、離心管,、酒精燈、試管架,、培養(yǎng)瓶,、培養(yǎng)皿,、消化液、基礎培養(yǎng)液,、胎牛血清,、Hanks 溶液、雙抗試液,、剪刀,、攝子、小燒杯,。

2. 操作步驟

（1） 在無菌條件下,，取待培養(yǎng)的組織適量，置入小燒杯中,， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次,，去掉組織塊表面的血污。

（2）用眼科剪將組織塊反復剪成0.5~ 1mm3的小塊,。

（3）再用Hanks 溶液反復漂洗,， 直至液體不混濁為止。等組織塊下沉,，將燒杯傾斜,，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液。

（4）用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml,、200μg/ml）的培養(yǎng)液再清洗,，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養(yǎng)液。

（5）用彎頭吸管吸取組織小塊,，均勻地置于培養(yǎng)皿內表面,，吸去多余的培養(yǎng)液，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜,。蓋好培養(yǎng)皿蓋,，做好標記， 置37°C 的CO2培養(yǎng)箱內,。

（6） 2~4h 后,，于超凈工作臺中，緩緩地向培養(yǎng)皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培養(yǎng)液少量,，以使組織塊浸沒在培養(yǎng)液中,。

（7）輕輕地將培養(yǎng)皿及組織塊移至CO2 培養(yǎng)箱， 如無特殊情況,，不必觀察,。1~2 周后，可觀察到細胞從組織塊邊緣長出,，形成生長暈,。

（9） 一般說來,，若培養(yǎng)液無明顯改變， 1 周換液1 次即可,。待細胞長滿整個培養(yǎng)皿內表面,，即可進行傳代培養(yǎng)。

大鼠皮膚成纖維細胞

細胞基本屬性：

質量檢測：纖維連接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽性,，純度高于 90%,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等

產品規(guī)格：5x105cells/T25或1mL凍存管

培養(yǎng)基：大鼠皮膚成纖維細胞專用培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳,；溫度：37℃

換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%

產品貨期現(xiàn)貨，1周左右

運輸方式T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應限制僅限于科學研究,，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用

背景介紹：

公司正在出售的產品：

血小板白細胞C激酶底物同源結構域M3抗體

CLIAKitforCryBeta(HumancrystalproteinsBeta)ELISAKit人晶體蛋白β規(guī)格：48T/96T

RatEpidermalgrowthfactor,EGFELISAKit 大鼠表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

細胞腺苷酸激酶(Adenylatekinase)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒20次

Ratdeoxypyridinoline,DPDELISAKit大鼠脫氧酚/脫氧啉(DPD)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠成纖維細胞生長因子23(FGF23)ELISA試劑盒 ，英文名： FGF23 ELISA Kit

偏肺病毒(hMPV)檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

HumaeceptorⅢfoheFcregionofimmunoglobulinG,FcγRⅢELISA試劑盒人GFc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

ELISAKitFA小鼠規(guī)格：48T/96T

HumancicaicialPemphigoid,CPELISAKit人瘢痕性天皰瘡抗體(CP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

人強啡肽(Dyn)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人腺病毒3(ADV3)抗體(IgG)免疫試劑盒 Human ADV3 IgG ELISA Kit

二(MDA)測試盒 可見分光光度法 50管/48樣

RatMotilin,MTLELISA試劑盒大鼠胃動素(MTL)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanHepatitisCvirusIgM,HCV-IgMELISA試劑盒人型肝炎IgM(HCV-IgM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanL-SelectinELISAKit人L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

腫瘤壞死因子配體超家族成員12A（CD266）抗體

骨形態(tài)發(fā)生蛋白11抗體

溶質載體家族蛋白7成員2抗體

MOSC1蛋白抗體

?；摎涿钢墟溈贵w

白細胞F肌動蛋白結合蛋白抗體

磷酸化KB抑制蛋白激酶α抗體

大鼠皮膚成纖維細胞CD5抗體

操作方法：

組織塊直接培養(yǎng)法（原代細胞培養(yǎng)實驗）

材料與儀器

【動物】選擇大約一半足孕時間的胚胎,，10－13天齡胚胎含有最大數(shù)量的未分化的間質細胞，成纖維細胞可從這些細胞衍生獲得,。每組小鼠胚胎1個【實驗材料】每組的超凈臺中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶,；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶,；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個,；3、50ml離心筒2個4,、滅菌培養(yǎng)皿1個,，細胞培養(yǎng)瓶1個5,、1ml，200μl移液器各1支,；槍頭盒2個,；無菌玻璃攪拌棒1個6、細胞計數(shù)板1塊,；7,、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把,；8,、酒精燈1臺；

步驟

1) 胚胎的分離,。適用哺乳動物(倉鼠,、小鼠和大鼠)2)將1－2個胚胎轉移至一個小的無菌培養(yǎng)皿中，用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎,，用PBS漂洗,。3)在無菌狀態(tài)下，將絞碎的胚胎轉移于一50ml的無菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無菌,用攪拌棒輕輕攪動,。4)在溫暖的環(huán)境中或置于37°C培養(yǎng)箱中輕輕搖動15分鐘,。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細胞的液體轉移至一無菌50ml的離心管中,，該管內按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,,。6)加人新鮮溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中，重復步驟4和5,。7)離心混合的細胞懸液,，1200r/rain，5分鐘,，棄上清,。8)用新鮮的無菌PBS重懸沉淀的細胞，按步驟7再次離心,。9)用PBS反復洗滌細胞直至上清清亮為止,。