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傳代培養(yǎng)操作步驟：

一,、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長密度,，當(dāng)細(xì)胞生長密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代,。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液,。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉,。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶內(nèi)加入適量含EDTA的,，一般應(yīng)覆蓋整個培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化,，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察,，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí),，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落,，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化,，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻,，以防消化過度,。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min,。

（6）棄上清,，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻,，使細(xì)胞均勻分散,。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)足培養(yǎng)液,，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間,，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

NR8383大鼠肺泡巨噬細(xì)胞

細(xì)胞別稱　NR-8383; NR 8383; NR8383.1; AgC11x3A; Normal Rat, August 3, 1983

背景介紹;NR8383 (正常大鼠,，1983年)來源于肺灌洗時(shí)的正常大鼠肺泡巨噬細(xì)胞,。細(xì)胞在gerbil肺細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)液存在下培養(yǎng)了大約8-9個月。隨后,，不再需要外源生長因子,。通過有限稀釋法從單個細(xì)胞克隆并亞克隆NR8383細(xì)胞，并三次用軟瓊脂亞克隆,。細(xì)胞表現(xiàn)出巨噬細(xì)胞的特性,，吞噬酵母多糖和銅綠，非特異性脂酶活性,，Fc受體,，氧化降解；分泌IL-1, TGF-β和IL-6,，可重復(fù)地響應(yīng)外源生長因子,。NR8383細(xì)胞響應(yīng)素，分泌TGF-β前體,。在刺激下,，TGF –β mRNA表達(dá)也上升。細(xì)胞對內(nèi)毒素敏感。1-10 鈉克/毫升的LPS水平抑制增生達(dá)50%,。 即使達(dá)到0.001毫克/毫升的水平,，LPS抑制還是無毒且在后續(xù)過程中可逆的。NR8383細(xì)胞株提供了高響應(yīng)的肺泡巨噬細(xì)胞的均一來源,，可以用于體外研究巨響細(xì)胞相關(guān)活性,。

生物安全等級;1

細(xì)胞規(guī)格;1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測;無

保藏機(jī)構(gòu);ATCC; CRL-2192

培養(yǎng)基;85%F12K+15% FBS+PS

培養(yǎng)條件;氣相：95%空氣+5%二氧化碳,；溫度：37℃

凍存條件無血清凍存液,，液氮儲

發(fā)貨方式復(fù)蘇發(fā)貨（免運(yùn)輸費(fèi)用）/  凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用） 順豐快遞

供應(yīng)限制僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

特別說明以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主

二,、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí),，即可進(jìn)行傳代,。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無菌,，且須在無菌超凈工作臺中紫外照射30min以上,，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長,。來源于不同動物種類,、組織類型的細(xì)胞，對培養(yǎng)液的要求不一樣,，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液,。

（3）胎牛血清對于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長起著關(guān)鍵作用,?？筛鶕?jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定,，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成,。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過長導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離,，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡,，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠,，或離心力過大對細(xì)胞產(chǎn)生損傷,。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴螅瑧?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀,，再加入培養(yǎng)液重懸,，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生,，以免損傷細(xì)胞,，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

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