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Rat PDGF Elisa試劑盒

本試劑僅供研究使用  標(biāo)本：血清或血漿及相關(guān)液體

性能:

1. 靈敏度：最小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品,。稀釋度的線(xiàn)性,。樣品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng),。

3. 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%。

原理：

采用雙抗體夾心法測(cè)定MTHFD2水平,。用純化的MTHFD2抗體包被微孔板,，制成固相載體，實(shí)驗(yàn)時(shí)依次在微孔板中加入樣本及標(biāo)準(zhǔn)品,，并加入 HRP 標(biāo)記的 ABP 抗體,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，反復(fù)洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,，再用硫酸終止反應(yīng)，轉(zhuǎn)變成黃色,。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關(guān),。采用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度（OD 值），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),，計(jì)算測(cè)試樣品中 ABP 濃度,。

試劑盒組成：

結(jié)果判斷與分析:

1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2,、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y）,，相應(yīng)的待測(cè)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X）,，做得相應(yīng)的曲線(xiàn)，樣品的待測(cè)物質(zhì)含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)換算出相應(yīng)的濃度,。

ELISA試劑盒為什么要嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作,？

一.先說(shuō)最嚴(yán)重的操作錯(cuò)誤，看錯(cuò)或壓根不看試劑盒配套說(shuō)明書(shū),，不按操作步驟加樣,。比如把競(jìng)爭(zhēng)法的試劑盒當(dāng)作雙抗體夾心法來(lái)做，導(dǎo)致的結(jié)果就是整板顯示很強(qiáng)的藍(lán)色,，無(wú)任何梯度,。

二.混用別的試劑盒里的試劑。不同廠家或者相同廠家的不同試劑盒,，所含的試劑成分很可能是不一樣的,，混用導(dǎo)致的結(jié)果是，浪費(fèi)珍貴的樣本,，樣品的回收率達(dá)不到預(yù)期值,，如果混用不同試劑盒的酶復(fù)合物，會(huì)導(dǎo)致顯色過(guò)弱或過(guò)強(qiáng),，因?yàn)槊糠N試劑盒所用酶復(fù)合物效價(jià)可能不一樣,。

三.不看文獻(xiàn)或者不做預(yù)實(shí)驗(yàn)。比如某個(gè)試劑盒按照其靈敏度范圍和文獻(xiàn)報(bào)道推算樣本應(yīng)該1:10稀釋?zhuān)Y(jié)果稀釋成1:1000,，導(dǎo)致的結(jié)果是顯色過(guò)弱,，結(jié)果不可用。

車(chē).不校準(zhǔn)移液器及培養(yǎng)箱的溫度濕度,。導(dǎo)致工作試劑濃度不準(zhǔn)確,，孵育溫度不合適，實(shí)驗(yàn)帶來(lái)誤差,。

五.洗滌不充分,，每孔洗液加樣過(guò)少，或者殘留,。導(dǎo)致的結(jié)果是顯色過(guò)快,，同時(shí)背景較高。

六.手洗板時(shí)所用槍頭沒(méi)有懸空加入洗液,，導(dǎo)致洗液污染,，整個(gè)實(shí)驗(yàn)失敗。

七.剩余酶標(biāo)板條未及時(shí)放入干燥袋,，導(dǎo)致酶標(biāo)板受潮,，下一次再做時(shí)，顯色過(guò)弱或污染,，CV值過(guò)高,。

八.試劑盒保存條件不當(dāng),。試劑盒要求放4℃的，放在了-20℃,?；蛘咭蠓?20℃的，放在了4℃,。均會(huì)導(dǎo)致試劑盒敏感性下降,。

以上只是最常見(jiàn)的操作錯(cuò)誤。順利完成一次ELISA實(shí)驗(yàn)需要注意的細(xì)節(jié)很多,，許多操作環(huán)節(jié)都影響到檢測(cè)的質(zhì)量。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作步驟：

1. 取出試劑盒,，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。

2. 分組：取出 96 孔板,，根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)

品組（6 個(gè)濃度）,、空白孔,、待測(cè)樣品組。

注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差,，保證準(zhǔn)確性,，建議設(shè)置復(fù)孔。

3. 加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入 50ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中,；空白對(duì)照孔加入 50ul 的蒸餾水,；其余微孔中加入 50ul

的待測(cè)樣本。

4. 加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組,、待測(cè)樣本組各孔中加入 100ul 的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）,。

5. 溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育 1 小時(shí),。

6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿(mǎn)每孔,，靜置 15-30s，充分清洗酶標(biāo)板 5 次,，用吸水紙拍干,。

7. 顯色：各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后，再加入顯色劑 B 液 50ul,。

8. 終止：25-37℃下避光反應(yīng) 10-15 分鐘,，加入 50ul 終止液。

9. 讀板：在 450nm 波長(zhǎng)讀取各孔的 OD 值,。