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大鼠鞘磷脂(SM)Elisa試劑盒

本試劑僅供研究使用  標(biāo)本：血清或血漿及相關(guān)液體

原理：

采用雙抗體夾心法測定MTHFD2水平。用純化的MTHFD2抗體包被微孔板,，制成固相載體,，實(shí)驗時依次在微孔板中加入樣本及標(biāo)準(zhǔn)品,，并加入 HRP 標(biāo)記的 ABP 抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，反復(fù)洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色，再用硫酸終止反應(yīng),，轉(zhuǎn)變成黃色,。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關(guān)。采用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度（OD 值）,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,，計算測試樣品中 ABP 濃度。

試劑盒組成：

性能:

1. 靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品,。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng),。

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%,。

結(jié)果判斷與分析:

1,、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y）,，相應(yīng)的待測物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線,，樣品的待測物質(zhì)含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

操作步驟：

1. 取出試劑盒,，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘,。

2. 分組：取出 96 孔板，根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)

品組（6 個濃度）,、空白孔、待測樣品組,。

注：為減少實(shí)驗誤差，保證準(zhǔn)確性,，建議設(shè)置復(fù)孔,。

3. 加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入 50ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入 50ul 的蒸餾水,；其余微孔中加入 50ul

的待測樣本,。

4. 加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入 100ul 的酶標(biāo)溶液（空白對照孔除外）,。

5. 溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后,，放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育 1 小時。

6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔,，靜置 15-30s,，充分清洗酶標(biāo)板 5 次，用吸水紙拍干,。

7. 顯色：各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后,，再加入顯色劑 B 液 50ul。

8. 終止：25-37℃下避光反應(yīng) 10-15 分鐘,，加入 50ul 終止液,。

9. 讀板：在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值,。
ELISA試劑盒為什么要嚴(yán)格按照說明書操作,？

一.先說最嚴(yán)重的操作錯誤，看錯或壓根不看試劑盒配套說明書,，不按操作步驟加樣。比如把競爭法的試劑盒當(dāng)作雙抗體夾心法來做,，導(dǎo)致的結(jié)果就是整板顯示很強(qiáng)的藍(lán)色，無任何梯度,。

二.混用別的試劑盒里的試劑。不同廠家或者相同廠家的不同試劑盒,，所含的試劑成分很可能是不一樣的，混用導(dǎo)致的結(jié)果是,，浪費(fèi)珍貴的樣本，樣品的回收率達(dá)不到預(yù)期值,，如果混用不同試劑盒的酶復(fù)合物,，會導(dǎo)致顯色過弱或過強(qiáng)，因為每種試劑盒所用酶復(fù)合物效價可能不一樣,。

三.不看文獻(xiàn)或者不做預(yù)實(shí)驗。比如某個試劑盒按照其靈敏度范圍和文獻(xiàn)報道推算樣本應(yīng)該1:10稀釋,，結(jié)果稀釋成1:1000，導(dǎo)致的結(jié)果是顯色過弱,，結(jié)果不可用。

車.不校準(zhǔn)移液器及培養(yǎng)箱的溫度濕度,。導(dǎo)致工作試劑濃度不準(zhǔn)確,，孵育溫度不合適，實(shí)驗帶來誤差,。

五.洗滌不充分，每孔洗液加樣過少,，或者殘留。導(dǎo)致的結(jié)果是顯色過快,，同時背景較高。

六.手洗板時所用槍頭沒有懸空加入洗液,，導(dǎo)致洗液污染,，整個實(shí)驗失敗。

七.剩余酶標(biāo)板條未及時放入干燥袋,，導(dǎo)致酶標(biāo)板受潮，下一次再做時,，顯色過弱或污染，CV值過高,。

八.試劑盒保存條件不當(dāng),。試劑盒要求放4℃的，放在了-20℃,。或者要求放-20℃的,，放在了4℃。均會導(dǎo)致試劑盒敏感性下降,。

以上只是最常見的操作錯誤。順利完成一次ELISA實(shí)驗需要注意的細(xì)節(jié)很多,，許多操作環(huán)節(jié)都影響到檢測的質(zhì)量。

公司正在出售的產(chǎn)品：