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商品屬性：

背景：

巨噬細胞移動抑制因子(Macrophage Migration Inhibitory Factor, MIF)是一種多效的細胞因子,，以同型三聚體的形式存在于體內。MIF初被鑒定為抑制巨噬細胞遷移的T細胞衍生因子,。近年來,，MIF因其在血管生成和腫瘤發(fā)生發(fā)展中的可能作用而受到越來越多的關注。腫瘤內MIF的表達與血管生成生長因子如白細胞介素8 (IL-8)和血管內皮生長因子(VEGF)的表達密切相關,，并且與腫瘤切除術后復發(fā)風險密切相關,。

標記：

1.將細胞培養(yǎng)基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標記培養(yǎng)基,。

2.提前將2×EdU標記培養(yǎng)基預熱,，然后將150微升2×EdU標記培養(yǎng)基與等體積細胞培養(yǎng)基混合，獲得1×EdU溶液,。

【注】：①不建議替換全部培養(yǎng)基,，這樣可能會影響細胞增殖的速度。②配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配,，用量以沒過細胞為宜,。

3.孵育細胞2 h，棄培養(yǎng)基,。

【注】：①培養(yǎng)時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態(tài),。②大多數(shù)腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2 h的孵育時間。

4.以1xPBS清洗細胞兩次,，每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留,。

【注】：對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。

實驗步驟：

1. 將細胞以 104-105 個細胞/孔的密度接種在 96 孔板 中,，加入 100μL 培養(yǎng)基,，含或不含待測化合物。在 CO2 培養(yǎng)箱中在 37℃ 下培養(yǎng)細胞 24 小時,。

2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質,。

3. 在培養(yǎng)箱中將培養(yǎng)板培養(yǎng)適當時間（如 6、12,、24 或 48 小時）,。

4. 向板的每個孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。

5. 將平板在培養(yǎng)箱中孵育 1-4 小時,。

6. 在讀板之前,，在定軌振蕩器上輕輕混勻。

7. 使用酶標儀測量 450nm 處的吸光度,。

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