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參考價 | ¥300-¥5000 | /盒 |
參考價:¥300 ~ ¥5000
更新時間:2024-11-22 20:49:33瀏覽次數(shù):885評價
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/96樣 50管/48樣 |
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貨號 | EY-01S166 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 僅用于科研 |
商品屬性:
產(chǎn)品名稱:總抗氧化能力(ABTS法)生化檢測試劑盒
規(guī)格:100管/96樣 50管/48樣
貨號 : EY-01S166
測試方法:微量法 可見分光光度法
分類:氧化與抗氧化系列
商品詳情:
研究意義:
測定對象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平,。在生物學(xué),、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究中常常檢測血漿、血清,、唾液,、尿液等各種體液,細(xì)胞或組織等裂解液,、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力,。
測定原理:
ABTS法是使用泛的間接檢測方法,可用于親水性和親脂性物質(zhì)抗氧化能力測定,。ABTS經(jīng)氧化后生成穩(wěn)定的藍(lán)綠色陽離子自由基 ABTS+,,能溶于水相或酸性乙醇介質(zhì)中,在734nm處有吸收,。被測物質(zhì)加入ABTS+溶液后,,所含抗氧化成分能與ABTS+發(fā)生反應(yīng)而使反應(yīng)體系褪色,。在734nm檢測吸光度的變化,,并以Trolox作為對照體系量化抗氧化物質(zhì)的抗氧化能力。
自備實(shí)驗(yàn)用品:
恒溫水浴鍋,、低溫離心機(jī),、酶標(biāo)儀,、96孔板和蒸餾水。
粗酶液提?。?/p>
1,、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿,。16000g,,4℃離心20min,取上清置冰上待測,。
2,、細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),,冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,,超聲3秒,間隔7秒,,總時間3min),;16000g, 4℃離心20min,,取上清液置冰上待測,。
3、血清等液體:直接測定,。
ADH測定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,,調(diào)節(jié)波長到340 nm,蒸餾水調(diào)零,。
2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min,。
3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四,,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,,分別記錄15s和75s時吸光值,分別記為A1和A2,?!鰽測定管=A1-A2。
測定步驟:
1,、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零,。
2,、將試劑二在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。
3,、操作表:
試劑名稱(μL) | 測定孔 |
樣本 | 20 |
試劑二 | 760 |
試劑三 | 10 |
試劑四 | 10 |
將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,,混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2,,計(jì)算ΔA=A1-A2。
注意:若A1-A2大于0.5,,需將樣本用提取液稀釋,,使A1-A2小于0.5,可提高檢測靈敏度,。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),。
NAD-MDH活力單位的計(jì)算:
1、血清(漿)NAD-MDH活力的計(jì)算
單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。
NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=6430×ΔA
2,、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NAD-MDH活力的計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。
NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。
NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T =6430×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,,8×10-4 L,;ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm,;d:比色皿光徑,,1cm;V樣:加入樣本體積,,0.02mL,;V樣總:加入提取液體積,1 mL,;T:反應(yīng)時間,,1 min;W:樣本質(zhì)量,,g,;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),,2000萬。
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