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目錄:上海一研生物科技有限公司>>生化檢測試劑盒>>脂肪酸代謝系列>> ATP檸檬酸裂解酶(ACL)生化檢測試劑盒

ATP檸檬酸裂解酶(ACL)生化檢測試劑盒
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參考價300-5000/盒
具體成交價以合同協議為準

參考價:¥300 ~ ¥5000

具體成交價以合同協議為準
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供貨周期 現貨 規(guī)格 50T
貨號 EY-01S1198 應用領域 生物產業(yè)
主要用途 僅用于科研
ATP檸檬酸裂解酶(ACL)生化檢測試劑盒高密度脂蛋白為血清蛋白之一,,主要由肝臟合成,,運載周圍組織中的,再轉化為膽汁酸或直接通過膽汁從腸道排出,,是一種抗動脈粥樣硬化的血漿脂蛋白,,是冠心病的保護因子,俗稱“血管清道夫",,對冠心病的臨床診斷是一個重要的參考指標,。

商品屬性:

產品名稱:ATP檸檬酸裂解酶(ACL)生化檢測試劑盒

規(guī)格:100/96 50/48 

貨號 : EY-01S1198

測試方法:微量法 紫外分光光度法  

分類:脂肪酸代謝系列

商品詳情:

測定意義

高密度脂蛋白為血清蛋白之一,主要由肝臟合成,,運載周圍組織中的,,再轉化為膽汁酸或直接通過膽汁從腸道排出,,是一種抗動脈粥樣硬化的血漿脂蛋白,是冠心病的保護因子,,俗稱血管清道夫",,對冠心病的臨床診斷是一個重要的參考指標。

測定原理

用沉淀劑分離血清中的高密度脂蛋白,,利用酯酶催化酯水解生成游離和游離脂肪酸,,從而把酯轉化為FC;進一步利用氧化酶催化FC氧化,,生成△4-膽甾烯酮和H2O2,;再利用過氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基和酚,生成紅色醌類化合物,;在500nm有特征吸收峰,。

需自備的儀器和用品

離心機,恒溫水浴鍋,、可見分光光度計/酶標儀,、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水,。

粗酶液提?。?/p>

1、組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿,。16000g,4℃離心20min,,取上清置冰上待測,。

2、細菌,、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),,冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,,間隔7秒,,總時間3min);16000g,, 4℃離心20min,,取上清液置冰上待測。

3,、血清等液體:直接測定,。


5.png



ADH測定操作:

1. 分光光度計預熱30 min,調節(jié)波長到340 nm,蒸餾水調零,。

2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min,。

3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四,,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,,分別記錄15s和75s時吸光值,分別記為A1和A2,?!鰽測定管=A1-A2。

測定步驟:

1,、分光光度計預熱30min以上,,調節(jié)波長至340nm,蒸餾水調零,。

2,、將試劑二在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。

3,、操作表:

試劑名稱μL

測定孔

樣本

20

試劑二

760

試劑三

10

試劑四

10


將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,,混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應1min后的吸光度A2,計算ΔA=A1-A2,。

注意:若A1-A2大于0.5,,需將樣本用提取液稀釋,使A1-A2小于0.5,,可提高檢測靈敏度,。計算公式中乘以相應稀釋倍數。

NAD-MDH活力單位的計算:

1,、血清(漿)NAD-MDH活力的計算

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。

NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=6430×ΔA

2、組織,、細菌或細胞中NAD-MDH活力的計算:

(1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。

NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T =6430×ΔA÷W

(3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。

NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA

V反總:反應體系總體積,8×10-4 L,;ε:NADH摩爾消光系數,,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,,1cm,;V樣:加入樣本體積,0.02mL,;V樣總:加入提取液體積,,1 mL,;T:反應時間,1 min,;W:樣本質量,,g;Cpr:樣本蛋白質濃度,,mg/mL,;2000:細胞或細菌總數,2000萬,。

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