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目錄:上海一研生物科技有限公司>>生化檢測試劑盒>>三羧酸循環(huán)系列>> 順烏頭酸酶(ACO)生化檢測試劑盒

順烏頭酸酶(ACO)生化檢測試劑盒
  • 順烏頭酸酶(ACO)生化檢測試劑盒
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參考價(jià)300-5000/盒
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

參考價(jià):¥300 ~ ¥5000

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更新時(shí)間:2024-11-22 10:02:52瀏覽次數(shù):1195評價(jià)

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100管/96樣 50管/50樣
貨號 EY-01S1153 應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 僅用于科研
順烏頭酸酶(ACO)生化檢測試劑盒順烏頭酸酶(aconitase),,三羧酸循環(huán)中的酶,催化檸檬酸轉(zhuǎn)變?yōu)楫悪幟仕?。檸檬酸本身不易氧化,在順烏頭酸酶作用下,,通過脫水與加水反應(yīng),,使羥基由β碳原子轉(zhuǎn)移到α碳原子上,生成易于脫氫氧化的異檸檬酸,,為進(jìn)一步的氧化脫羧反應(yīng)作準(zhǔn)備,。

商品屬性:

產(chǎn)品名稱:順烏頭酸酶(ACO)生化檢測試劑盒

規(guī)格:100/96 50/50 

貨號 : EY-01S1153

測試方法:微量法 紫外分光光度法  

分類:三羧酸循環(huán)系列

商品詳情:

測定意義

順烏頭酸酶(aconitase),三羧酸循環(huán)中的酶,,催化檸檬酸轉(zhuǎn)變?yōu)楫悪幟仕?。檸檬酸本身不易氧化,在順烏頭酸酶作用下,,通過脫水與加水反應(yīng),,使羥基由β碳原子轉(zhuǎn)移到α碳原子上,生成易于脫氫氧化的異檸檬酸,,為進(jìn)一步的氧化脫羧反應(yīng)作準(zhǔn)備,。

測定原理

ACO催化檸檬酸轉(zhuǎn)化成異檸檬酸,異檸檬酸氧化脫羧將NAD+ 還原生成NADH,,導(dǎo)致340nm處光吸收上升,。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋,、臺式離心機(jī),、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板,、研缽,、冰和蒸餾水。

5.png



ADH測定操作:

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,,調(diào)節(jié)波長到340 nm,,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min,。

3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液,、800μL試劑三和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,,分別記為A1和A2,。△A測定管=A1-A2,。

測定步驟:

1,、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,,蒸餾水調(diào)零,。

2、將試劑二在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min以上,。

3,、操作表:

試劑名稱μL

測定孔

樣本

20

試劑二

760

試劑三

10

試劑四

10


將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2,,計(jì)算ΔA=A1-A2,。

注意:若A1-A2大于0.5,需將樣本用提取液稀釋,,使A1-A2小于0.5,,可提高檢測靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),。

NAD-MDH活力單位的計(jì)算:

1,、血清(漿)NAD-MDH活力的計(jì)算

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=6430×ΔA

2,、組織,、細(xì)菌或細(xì)胞中NAD-MDH活力的計(jì)算:

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位,。

NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T =6430×ΔA÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位,。

NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,8×10-4 L,;ε:NADH摩爾消光系數(shù),,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,,1cm,;V樣:加入樣本體積,0.02mL,;V樣總:加入提取液體積,,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,,1 min;W:樣本質(zhì)量,,g,;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),,2000萬,。

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