目錄:上海一研生物科技有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>三羧酸循環(huán)系列>> 順烏頭酸酶(ACO)生化檢測(cè)試劑盒
| 參考價(jià) | ￥300-￥5000 | /盒 |
參考價(jià)：￥300 ~ ￥5000
更新時(shí)間：2024-11-22 10:02:52瀏覽次數(shù)：1192評(píng)價(jià)
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/96樣 50管/50樣 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | EY-01S1153 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 僅用于科研 |
商品屬性：
產(chǎn)品名稱：順烏頭酸酶(ACO)生化檢測(cè)試劑盒
規(guī)格：100管/96樣 50管/50樣
貨號(hào) : EY-01S1153
測(cè)試方法:微量法 紫外分光光度法
分類：三羧酸循環(huán)系列
商品詳情：
測(cè)定意義
順烏頭酸酶（aconitase）,，三羧酸循環(huán)中的酶，催化檸檬酸轉(zhuǎn)變?yōu)楫悪幟仕?。檸檬酸本身不易氧化,，在順烏頭酸酶作用下，通過脫水與加水反應(yīng),，使羥基由β碳原子轉(zhuǎn)移到α碳原子上,，生成易于脫氫氧化的異檸檬酸,，為進(jìn)一步的氧化脫羧反應(yīng)作準(zhǔn)備,。
測(cè)定原理
ACO催化檸檬酸轉(zhuǎn)化成異檸檬酸，異檸檬酸氧化脫羧將NAD+ 還原生成NADH,，導(dǎo)致340nm處光吸收上升,。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋,、臺(tái)式離心機(jī),、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板,、研缽,、冰和蒸餾水。
ADH測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min,。
3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液,、800μL試劑三和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,，分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,，分別記為A1和A2?！鰽測(cè)定管=A1-A2,。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,，蒸餾水調(diào)零。
2,、將試劑二在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min以上,。
3、操作表：
試劑名稱（μL） | 測(cè)定孔 |
樣本 | 20 |
試劑二 | 760 |
試劑三 | 10 |
試劑四 | 10 |
將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，混勻后立即在340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2,，計(jì)算ΔA=A1-A2,。
注意：若A1-A2大于0.5，需將樣本用提取液稀釋,，使A1-A2小于0.5,，可提高檢測(cè)靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),。
NAD-MDH活力單位的計(jì)算：
1,、血清（漿）NAD-MDH活力的計(jì)算
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=6430×ΔA
2,、組織,、細(xì)菌或細(xì)胞中NAD-MDH活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位,。
NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T =6430×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位,。
NAD-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（2000×V樣÷V樣總）÷T=3.215×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，8×10-4 L,；ε：NADH摩爾消光系數(shù),，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑,，1cm,；V樣：加入樣本體積，0.02mL,；V樣總：加入提取液體積,，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間,，1 min,；W：樣本質(zhì)量，g,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL；2000：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),，2000萬,。
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