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| 參考價 | ￥300-￥5000 | /盒 |
參考價：￥300 ~ ￥5000
更新時間：2024-11-21 21:25:23瀏覽次數(shù)：1114評價
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | EY-01S11 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 僅用于科研 |
商品屬性：
產(chǎn)品名稱：輔酶ⅠNAD(H)含量生化檢測試劑盒
規(guī)格：100管/48樣 50管/24樣
貨號 : EY-01S11
測試方法:微量法 可見分光光度法
分類：輔酶Ⅰ系列
商品詳情：
測定意義 輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物,、植物,、微生物和培養(yǎng)細胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環(huán)（TCA）的主要氫受體,，生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧,，在合成ATP的同時，形成大量的ROS,，同時NADH再生為NAD+,。糖,、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過這一體系完成,。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環(huán)的強弱,。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高，處于過氧化狀態(tài),。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán),。另外,，NAD+降解產(chǎn)物對細胞信號傳導(dǎo)、代謝和基因表達等具有重要的調(diào)控作用,。
測定原理 分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH,，NADH通過PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍（MTT）為甲瓚,，在570nm下檢測吸光值,；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進一步采用MTT還原法檢測,。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計/酶標(biāo)儀,、臺式離心機、移液器,、微量石英比色皿/96孔板,、研缽、冰和蒸餾水,。
ADH測定操作：
1. 分光光度計預(yù)熱30 min,，調(diào)節(jié)波長到340 nm，蒸餾水調(diào)零,。
2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min,。
3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四,，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,，分別記錄15s和75s時吸光值，分別記為A1和A2,?！鰽測定管=A1-A2。
測定步驟：
1,、分光光度計預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零,。
2,、將試劑二在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。
3、操作表：
試劑名稱（μL） | 測定孔 |
樣本 | 20 |
試劑二 | 760 |
試劑三 | 10 |
試劑四 | 10 |
將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,，混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2,，計算ΔA=A1-A2。
注意：若A1-A2大于0.5,，需將樣本用提取液稀釋,，使A1-A2小于0.5，可提高檢測靈敏度,。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),。
NAD-MDH活力單位的計算：
1、血清（漿）NAD-MDH活力的計算
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。
NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=6430×ΔA
2、組織,、細菌或細胞中NAD-MDH活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。
NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T =6430×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。
NAD-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（2000×V樣÷V樣總）÷T=3.215×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積,，8×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù),，6.22×103 L / mol /cm,；d：比色皿光徑，1cm,；V樣：加入樣本體積,，0.02mL；V樣總：加入提取液體積,，1 mL,；T：反應(yīng)時間，1 min,；W：樣本質(zhì)量,，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；2000：細胞或細菌總數(shù)，2000萬,。
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