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產(chǎn)品名稱：NAD蘋果酸酶（NADME）生化檢測(cè)試劑盒

規(guī)格：100管/96樣 50管/48樣 

貨號(hào) : EY-01S121

測(cè)試方法:微量法　紫外分光光度法　　

分類：輔酶Ⅱ系列

測(cè)定意義：

ME廣泛存在于微生物,、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物和植物胞漿中,，尤其在植物組織中活性較高,。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng)，產(chǎn)生丙酮酸和CO2,，以及伴隨NAD(P)+的還原反應(yīng),，是蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān),。近年來(lái)植物ME活性測(cè)定較多,，已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專一性和對(duì)底物特異性的不同,，可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40),。

測(cè)定原理：

NAD-ME催化NAD+還原成NADH，在340nm下測(cè)定NADH增加速率,。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī),、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑一：液體×1瓶,，室溫保存,。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存,。              

試劑三：粉劑×2瓶,，－20℃保存,。臨用前加入22mL試劑二，現(xiàn)配現(xiàn)用,。

試劑四：液體×1支,，4℃保存。

1,、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g,，4℃離心20min,，取上清置冰上待測(cè)。

2,、細(xì)菌,、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w,，超聲3秒,，間隔7秒，總時(shí)間3min）,；16000g,， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測(cè),。

3,、血清等液體：直接測(cè)定。

（1）按照蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位,。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T

=1608×△÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位,。

ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A÷W

（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義：25℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A ÷細(xì)胞數(shù)量

（4）按液體體積計(jì)算

活性單位定義：25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位,。

ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T

=1608×△A

ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm,；d：比色皿光徑,，1 cm；V反總：反應(yīng)體系總體積,，1000μL=0.001 L,；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積,，100μL=0.1 mL,；T：反應(yīng)時(shí)間,，1min。