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參考價(jià) | ¥300-¥5000 | /盒 |
參考價(jià):¥300 ~ ¥5000
更新時(shí)間:2024-11-21 20:22:31瀏覽次數(shù):975評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/96樣 50管/48樣 |
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貨號(hào) | EY-01S119 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 僅用于科研 |
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)生化檢測試劑盒 | 100管/96樣 50管/48樣 | EY-01S119 |
商品詳情:
測定意義:
ICDHc(EC 1.1.1.42)廣泛存在于動(dòng)物,、植物,、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化異檸檬酸脫氫脫羧生成 α-酮戊二酸,,同時(shí)還原NADP+生成NADPH。ICDHc是細(xì)胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來源,,在逆境中該酶活性通常會(huì)發(fā)生顯著變化,。
測定原理:
利用ICDHc催化NADP+還原成NADPH反應(yīng),在340 nm下測定NADPH濃度的增加,。
所需的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī),、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板、研缽,、冰和蒸餾水,。
ADH測定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到340 nm,,蒸餾水調(diào)零,。
2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。
3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液,、800μL試劑三和100μL試劑四,,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,,分別記為A1和A2,。△A測定管=A1-A2,。
測定步驟:
1,、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,,蒸餾水調(diào)零,。
2、將試劑二在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴10min以上,。
3,、操作表:
試劑名稱(μL) | 測定孔 |
樣本 | 20 |
試劑二 | 760 |
試劑三 | 10 |
試劑四 | 10 |
將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2,,計(jì)算ΔA=A1-A2,。
注意:若A1-A2大于0.5,需將樣本用提取液稀釋,使A1-A2小于0.5,,可提高檢測靈敏度,。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
NAD-MDH活力單位的計(jì)算:
1,、血清(漿)NAD-MDH活力的計(jì)算
單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位,。
NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=6430×ΔA
2、組織,、細(xì)菌或細(xì)胞中NAD-MDH活力的計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位,。
NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T =6430×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位,。
NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,,8×10-4 L;ε:NADH摩爾消光系數(shù),,6.22×103 L / mol /cm,;d:比色皿光徑,1cm,;V樣:加入樣本體積,,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,,1 mL,;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min,;W:樣本質(zhì)量,,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,,mg/mL,;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),2000萬,。
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