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一,、費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌實(shí)驗(yàn)流程

二、實(shí)驗(yàn)安排

第1次 菌體超聲破壁,、離心,、包涵體復(fù)性、 裝離子交換柱

第2次 測(cè)酶活,、定蛋白離子交換層析 層析樣品進(jìn)行濃縮,、透析

第3次 濃縮、透析前,、后樣品測(cè)活,、定蛋白 裝分子篩柱

第4次 分子篩層析，并對(duì)收集樣品進(jìn)行測(cè)活,、定蛋白等

第5次 對(duì)分離純化各樣品進(jìn)行蛋白電泳分析,，并繪出分離純化表

三、實(shí)驗(yàn)操作

第1次： 菌體超聲破壁,、離心,、包涵體復(fù)性、裝離子交換柱

實(shí)驗(yàn)順序：超聲破壁→離心→裝離子交換柱→平衡→包涵體復(fù)性

掌握要點(diǎn)：破壁原理

裝離子交換柱方法

包涵體復(fù)性原理及方法

第2 次：測(cè)酶活,、定蛋白,、 離子交換層析分析 、 層析樣品進(jìn)行濃縮,、透析

實(shí)驗(yàn)順序：測(cè)酶活→上柱→梯度洗脫→定蛋白→紫外吸收測(cè)蛋白峰→酶活曲線測(cè)定→收集樣品→ 濃縮 →透析

涉及單元實(shí)驗(yàn)：測(cè)酶活,、定蛋白、 離子交換層析,、濃縮,、透析

掌握要點(diǎn)：堿性磷酸單酯酶測(cè)活原理

紫外吸收法繪蛋白濃度曲線方法

離子交換層析原理及方法

濃縮及透析常用方法

第3次：濃縮、透析前,、后樣品測(cè)活,、定蛋白、裝分子篩柱

實(shí)驗(yàn)順序：濃縮透析前,、后樣品測(cè)活→考馬斯亮藍(lán)法定蛋白→裝分子篩柱→平衡

涉及單元實(shí)驗(yàn)：測(cè)活,、定蛋白、裝分子篩柱

掌握要點(diǎn)：考馬斯亮藍(lán)法測(cè)蛋白濃度方法

費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌裝分子篩柱方法

第4次：分子篩層析,，并對(duì)收集樣品進(jìn)行分析

實(shí)驗(yàn)順序：測(cè)活樣品進(jìn)行分子篩層析→紫外吸收測(cè)蛋白峰--酶活曲線測(cè)定→考馬斯亮藍(lán)法定蛋白

涉及單元實(shí)驗(yàn)：破壁,、離心,、分子篩層析、復(fù)性

掌握要點(diǎn)：分子篩層析原理

對(duì)分離純化各樣品計(jì)算比活

第5次：對(duì)分離純化各樣品進(jìn)行蛋白電泳分析,， 并繪出分離純化表

實(shí)驗(yàn)順序：蛋白電泳,，同時(shí)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析

涉及單元實(shí)驗(yàn)：蛋白電泳

掌握要點(diǎn)：掌握蛋白電泳方法

了解分離純化樣品純度鑒定的各種方法

繪制酶的分離純化表
費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌