ELISA試劑盒實驗的必要條件
血清標本可按常規(guī)方法采集，應注意避免溶血,，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP為標記的ELISA測定中,，溶血標本可能會增加非特異性顯色,。
血清標本宜在新鮮時檢測,。如有細菌污染,，菌體中可能含有內源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應,。如在冰箱中保存過久,，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA檢測試劑盒中可使本底加深,。
一般說來,，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存,。凍結血清
融解后,，蛋白質局部濃縮，分布不均,，應充分混勻宜輕緩,，避免氣泡，可上下顛倒混和,，不要在混勻器上強烈振蕩?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢吮緫入x心或過濾,，澄清后再檢測。反復凍融會使抗體 效價跌落,，所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存,。保存血清自采集時就應注意無菌操作,，也可加入適當防腐劑（見3.2.4）,。
的試劑,，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件,。
ELISA檢測試劑盒的操作因固相載體的形成不同而有所差異,，國內醫(yī)學檢驗一般均用板式點。
ELISA各個操作步驟的注意要點,，珠式,、管式及磁性球ELSIA,，國外試劑均與特殊儀器配合應用,，嚴格遵照規(guī)定操作,，必能得出準確的結果,。
可用作ELISA測定的標本十分廣泛,，體液（如血清 ）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液,、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體 或抗原成份,。有些標本可直接進行測定（如血清 ,、尿液）,，有些則需經(jīng)預處理（如糞便和某些分泌物）,。大部分ELISA檢測均以血清為標本,。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清,。制備血漿標本需借助于抗凝劑,，而血清標本只要待血清自然凝固。除特殊情況外,，在醫(yī)學檢驗中均以血清作為檢測標本,。在ELISA中血漿和血清可同等應用,。
按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑,。ELISA中用的蒸餾 水或去離子水,，包括用于洗滌的,，應為新鮮的和高質量的,。自配的緩沖液應用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用,。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存,。
在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標本,，加酶結合物,，加底物。加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部,，并注意不可濺出,，不可產(chǎn)生氣泡。
加標本一般用微量加樣器,，按規(guī)定的量加入板孔中,。每次加標本應更換吸嘴,，以發(fā)生交叉污染,，也可用一次性的定量塑料管加樣,。有此測定（如間接法ELISA）需用稀的血清,，可在試管 中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣,。也可在板孔中加入稀釋液,，再在其加入血清標本,，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結合物應用液和底物用液時可用定量多道加液器,，使加液過程迅速完成,。
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