原位雜交（ISH）這種顯微鏡方法解決了這兩個問題。它利用標(biāo)記的核酸探針來確定組織及細胞中DNA或RNA的空間位置和豐度,。這種方法有兩種形式,，熒光（FISH）和顯色（CISH）,。之前,，F(xiàn)ISH和CISH一直是定性的：要么陽性，要么陰性,。隨著技術(shù)的發(fā)展,，定量版本也被開發(fā)出來。
單分子熒光原位雜交（smFISH）是一種新的基因表達分析方法,，能報告轉(zhuǎn)錄本豐度和空間定位,。但到目前為止，smFISH還不能實現(xiàn)基因組范圍的分析,。如今,，瑞士蘇黎世大學(xué)的研究人員報告了一種策略，讓smFISH也插上高通量的翅膀,。1
蘇黎世大學(xué)分子生命科學(xué)研究所的Lucas Pelkmans領(lǐng)導(dǎo)了這項研究,。他解釋道，傳統(tǒng)的smFISH有兩個主要缺點,，阻礙了它的高通量應(yīng)用,。首先，它產(chǎn)生相對較弱的信號,，信噪比不太高,。其次，它不能擴展,，因為它需要高的放大倍數(shù),，長的成像時間，并且每個轉(zhuǎn)錄本的條件需要優(yōu)化,。
傳統(tǒng)的smFISH利用一系列短的寡核苷酸來檢測轉(zhuǎn)錄本,，每個寡核苷酸上標(biāo)記有一個熒光基團。這樣,，mRNA上就有足夠濃度的熒光分子,，產(chǎn)生可見的光點,，但通常只有在60x或100x放大倍數(shù)下,，使用油浸,、大數(shù)值孔徑的透鏡才行。
Pelkmans及其團隊以支鏈DNA（branched DNA）為基礎(chǔ)開發(fā)了他們的方法,。在這一策略中,，15對寡核苷酸探針靶定一個特定的mRNA。這些探針將作為一級preamplifier探針的著陸墊,，又為一些二級的amplifier探針提供了結(jié)合位點,，zui后是一組三級的標(biāo)記探針。
Pelkmans解釋道,，這就像在轉(zhuǎn)錄本上種下了15顆雜交探針的樹,。這種方法產(chǎn)生了放大的信號，亮度增加100倍,，信噪比也提高3倍,，而成像時間比傳統(tǒng)方法大大縮短。
憑借這種強烈的信號,，研究小組將實驗過程自動化,。他們建立了928個人類基因的支鏈DNA庫，并用培養(yǎng)的HeLa細胞進行了檢驗,。在這一過程中,，他們使用384孔板，每孔用一個探針,，并使用相同的雜交和洗滌條件,。雜交之后，他們以40x放大倍數(shù)對每孔中約1萬個細胞進行成像,，并利用內(nèi)部開發(fā)的算法來提取轉(zhuǎn)錄本豐度和空間特征,，例如，斑點靠近細胞膜,，還是細胞核,，集中還是分散。他們總共收集了18個空間變量,，并利用計算機集群來評估它們與基因調(diào)控的關(guān)系。
數(shù)據(jù)表明,，那些表現(xiàn)出相似的空間特征和相似的細胞間差異的基因,，也更有可能具有相似的功能作用。
“事實證明,，那些空間特征實際上提供了更多信息,，可預(yù)測基因之間的功能性相互作用，"Pelkmans解釋道,。
大家都認(rèn)為,，單細胞水平的轉(zhuǎn)錄充滿噪音,。也就是說，細胞質(zhì)中兩個遺傳上*相同的細胞可能有著*不同的轉(zhuǎn)錄本數(shù)量,。然而,，蛋白水平不一定反映這種轉(zhuǎn)錄本豐度。Pelkmans認(rèn)為,，生物過程的可靠性有可能源于mRNA亞細胞定位的調(diào)節(jié),，而他們的數(shù)據(jù)也支持這一觀點。如今,，他們的目標(biāo)是直接檢驗這一假說,，以確定“轉(zhuǎn)錄本的空間結(jié)構(gòu)是否緩沖了轉(zhuǎn)錄噪音"。
霍華德?休斯醫(yī)學(xué)研究所的項目科學(xué)家Timothee Lionnet認(rèn)為這項研究是“自動化的力作",。他談道：“他們將FISH技術(shù)帶到了多重PCR或RNA-Seq技術(shù)所達到的通量,。"
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