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一,、實驗準備

  （1）儀器：凈化工作臺、離心機,、恒溫水浴箱,、倒置相差顯微鏡、培養(yǎng)箱,、液氮冰箱

  （2）玻璃器皿：吸管（彎頭,、直頭）、培養(yǎng)瓶,、玻璃瓶（250ml,、100ml）、廢液缸

  （3）塑料器皿：吸頭,、槍頭,、膠塞、移液管（10ml）,、15ml離心管,、凍存管（1～2ml）

  （4）其他物品：微量加樣槍、紅血球計數(shù)板,、記號筆,、醫(yī)用橡皮膏、移液槍

  （5）試劑：PBS,、小牛血清,、培養(yǎng)液、雙抗（青霉素,、鏈霉素）,、胰蛋白酶（0.08%）

二、操作步驟

  （1）從液氮容器中取出凍存管,，直接浸入37℃溫水中,，并不時搖動令其盡快融化。

  （2）從37℃水浴中取出凍存管,，75％酒精消毒后,，打開蓋子,，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管中,。PriCells推薦接種培養(yǎng)瓶,，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。

 （3）離心,，1000rpm,，5min。PriCells推薦不離心,。

 （4）棄去上清液,，加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細胞，計數(shù),，調(diào)整細胞密度,，接種培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),。PriCells推薦小牛血清濃度依據(jù)原代細胞種類,。

 （5）次日更換一次1／2培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng),。

三,、注意事項 

 （1）將凍存管從液氮容器中取出時，要做好防護工作,，以免凍傷,。

 （2）取出凍存管后立即放入水浴中，使其盡快融化（在1－2分鐘內(nèi)）,。

 （3）復蘇用新配制的培養(yǎng)液。