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一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

  （1）儀器：凈化工作臺(tái),、離心機(jī),、恒溫水浴箱、倒置相差顯微鏡,、培養(yǎng)箱,、液氮冰箱

  （2）玻璃器皿：吸管（彎頭、直頭）,、培養(yǎng)瓶,、玻璃瓶（250ml、100ml）,、廢液缸

  （3）塑料器皿：吸頭,、槍頭、膠塞,、移液管（10ml）,、15ml離心管、凍存管（1～2ml）

  （4）其他物品：微量加樣槍,、紅血球計(jì)數(shù)板,、記號(hào)筆、醫(yī)用橡皮膏,、移液槍

  （5）試劑：PBS,、小牛血清、培養(yǎng)液,、雙抗（青霉素,、鏈霉素）、胰蛋白酶（0.08%）

二,、操作步驟

  （1）從液氮容器中取出凍存管,，直接浸入37℃溫水中，并不時(shí)搖動(dòng)令其盡快融化,。

  （2）從37℃水浴中取出凍存管,，75％酒精消毒后，打開蓋子,，用吸管吸出細(xì)胞懸液,，加到離心管中。PriCells推薦接種培養(yǎng)瓶,，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),。

 （3）離心,，1000rpm，5min,。PriCells推薦不離心,。

 （4）棄去上清液，加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,，計(jì)數(shù),，調(diào)整細(xì)胞密度，接種培養(yǎng)瓶,，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),。PriCells推薦小牛血清濃度依據(jù)原代細(xì)胞種類。

 （5）次日更換一次1／2培養(yǎng)液,，繼續(xù)培養(yǎng),。

三、注意事項(xiàng) 

 （1）將凍存管從液氮容器中取出時(shí),，要做好防護(hù)工作,，以免凍傷。

 （2）取出凍存管后立即放入水浴中,，使其盡快融化（在1－2分鐘內(nèi)）,。

 （3）復(fù)蘇用新配制的培養(yǎng)液。