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peprotech細胞因子溶解操作方法

    PeproTech細胞因子中不含載體蛋白（Carrier Protein）或其他添加劑（如BSA,、HAS或蔗糖等），并且通常以zui少量的鹽來進行凍干處理,，因此微量的細胞因子在凍干過程中會沉積于管內,，形成很薄或不可見的蛋白層。所以我們建議在收到產品后,，務必在開蓋前先離心,，使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底（此時能否見到白色沉淀均屬正?，F象）。

1．離心：高速離心 (10, 000 rpm) 20-30 秒,，或低速離心 (2, 000 rpm) 5 分鐘,。

2．溶解（Reconstitution）：用去離子水或其它緩沖液（根據說明書要求進行選擇）溶解至說明書要求的濃度 (一般為 0.1-1.0 mg/mL，如10ug的產品,，需用10uL-100uL的去離子水或緩沖液溶解),。溶解時不可振蕩，避免因化學鍵的斷裂造成蛋白失活,，可加入適當的溶劑輕搖并靜置一段時間,，待細胞因子*溶解后使用。溶劑的選擇：

1）要求用去離子水溶解的產品,，務必不可用鹽溶液,，避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出；

2) 要求用鹽溶液溶解的產品,，請依照說明書上的濃度,，同樣也是為了避免過高的鹽濃度。

3．分裝和貯存（Aliquot and Storage）：蛋白溶解后可根據自己的實驗需要進一步稀釋成工作液,，稀釋可用RPMI 1640,、DMEM或PBS等溶液，其中含有5-10%的FCS （小?；蛱ヅＱ澹┗?.5 %的BSA（牛血清白蛋白）來穩(wěn)定蛋白,。工作液在4℃可保存1周，如需長期保存,，則需分裝凍存于-20℃ （注意：不可凍存于-80℃）,。分裝時每管中工作液的體積是一次實驗的用量，以實現每次實驗用完一只工作液,，避免反復凍融引起蛋白活性的降低,。細胞