多數(shù)細(xì)胞系和原代細(xì)胞都會以一種單層的形式生長（單層細(xì)胞）或者覆蓋在玻璃或經(jīng)處理的塑料物體表面。為了保持細(xì)胞的健康與活躍增殖,，通常需要對細(xì)胞進(jìn)行有規(guī)律的傳代,。
zui常見的傳代方法是使用蛋白酶如胰酶或膠原酶破壞細(xì)胞間以及細(xì)胞與培養(yǎng)介質(zhì)間的連接。當(dāng)細(xì)胞被解離成單細(xì)胞懸液時,，再將它們稀釋并分發(fā)至新的培養(yǎng)容器中,。在那里，細(xì)胞可以重新貼壁生長和分裂,，然后經(jīng)過一段時間培養(yǎng),，細(xì)胞又再一次長滿（接近匯合）。此時，細(xì)胞又需要進(jìn)行傳代或用于下游實驗,。
注意：以下指南描述了典型單層細(xì)胞的常規(guī)傳代與維持的基本原則,。為了得到一致的結(jié)果，堅持良好的培養(yǎng)記錄非常重要,，記錄應(yīng)包括細(xì)胞傳代的日期和傳代的次數(shù),。
細(xì)胞的檢查：應(yīng)該養(yǎng)成良好的習(xí)慣對細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)的和認(rèn)真的檢查，以了解它們的狀態(tài)和健康情況,。
首先,，用肉眼檢查培養(yǎng)容器中是否存在可見的微生物污染,，比如培養(yǎng)基pH改變,、渾濁或有顆粒樣的物體。同時也要注意觀察有沒有小的真菌菌落,，因為它們在顯微鏡下不易被發(fā)現(xiàn),。這些菌落可能會飄浮在液體表面，特別是在培養(yǎng)容器周邊附近,。
其次,，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞常規(guī)形態(tài)和生長狀態(tài)，留意檢查任何鏡下可見的微生物污染的跡象,。在某些細(xì)胞系中,，培養(yǎng)液中漂浮的細(xì)胞通常是死亡的細(xì)胞。但是,，許多細(xì)胞在進(jìn)行有絲分裂的時候也會變圓,，形成折光性很強(qiáng)（很亮）的球體，并且在受到擾動后也會飄浮起來,。兩者的區(qū)別在于,，死細(xì)胞通常會變圓脫落但一般折光性不會很強(qiáng)。
除了這些日常檢查外,，還需要對細(xì)胞進(jìn)行周期性的真菌,、細(xì)菌以及支原體檢查。
培養(yǎng)液的準(zhǔn)備：準(zhǔn)備針對特定細(xì)胞系在購買或文獻(xiàn)中推薦使用的新鮮培養(yǎng)液,，并用記號筆在培養(yǎng)容器上標(biāo)記傳代時間和細(xì)胞代數(shù)等信息,。確保添加了補(bǔ)充成分（如：谷氨酰胺、生長因子,、抗生素等）并且預(yù)先放置培養(yǎng)箱進(jìn)行了pH平衡,。一個75cm2的培養(yǎng)瓶大約需要12-15ml培養(yǎng)液，如何使用其他規(guī)格的培養(yǎng)容器需要進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整,。
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