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一、原理與意義

    免疫熒光組織（細(xì)胞）化學(xué)染色方法——補體法,，是一種熒光抗體染色法,。本法之熒光抗體不受免疫血清的動物種屬的限制，因而一種熒光抗體可作更廣泛的應(yīng)用,，敏感性亦較間接法高,，效價低的免疫血清亦可應(yīng)用，節(jié)省免疫血清,，尤其是對檢查形態(tài)小的如立克氏體,、病毒顆粒等或濃度較低的抗原物質(zhì)時甚為理想。

二,、操作指南

1,、材料

（1）免疫血清60℃滅活20min，用Kolmers鹽水作2倍稀釋成1：2,，1：4,，1：8……。補體用1：10稀釋的新鮮豚鼠血清,，抗補體熒光抗體等,，按下述的補體法染色,。免疫血清補體結(jié)合的效價,，如為1：32則免疫血清應(yīng)作1：8稀釋。

（2）補體用新鮮豚鼠血清一般作1：10稀釋或按補體結(jié)合反應(yīng)試管法所測定的結(jié)果,，按2單位的比例,，用Kolmers鹽水稀釋備用。Kolmers鹽水配法：即在pH7.4,、0.1mol/L的磷酸緩沖鹽水中,，溶解MgSO4的含量為0.01%濃度。

（3）抗補體熒光抗體：在免疫血清效價為1：4,，補體為2單位的條件下,，用補體染色法測定免疫豚鼠球蛋白熒光抗體的染色效價，然后按染色效價1：4的濃度用Kolmers鹽水稀釋備用,。

2,、操作步驟

（1）涂片或切片固定。

（2）吸取經(jīng)適當(dāng)稀釋之免疫血清及補體之等量混合液（此時免疫血清及補體又都稀釋一倍）滴于切片上,，37℃作用30min,，置于保持一定濕度的染色盒內(nèi),。

（3）用緩沖鹽水洗2次，攪拌,，每次5min,，吸干標(biāo)本周圍水液。

（4）滴加經(jīng)過適當(dāng)稀釋之抗補體熒光抗體30min,，37℃,，水洗同（3）。

（5）蒸餾水洗1min,，緩沖甘油封固,。

3．對照染色

（1）抗原對照。

（2）抗血清對照：用正常兔血清代替免疫血清,。

（3）滅活補體對照：將補體經(jīng)56℃ 30min處理后,，按補體同樣比例稀釋，與免疫血清等量混合后,，進(jìn)行補體法染色,。