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酶聯(lián)免疫使用試劑盒實驗檢測過程中值得關注的問題

閱讀:1331      發(fā)布時間:2015-5-13
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1、儀器質控
 為使儀器保持*工作狀態(tài),,應建立維護和校正儀器的標準操作程序(SOP),,所要控制的儀器包括移液器(加樣槍)、溫箱,、洗板機和酶標儀,。
◎移液器: ELISA試劑盒加樣量小(20-200μl),,其準確性直接影響實驗結果,,利用稱重法檢查:低、中,、高三個刻度分別吸取指示量的水,,萬分之一天平稱重后計算吸量是否準確,一般應在±5%以內;
◎恒溫箱: 經常檢查恒溫箱溫度計所示的溫度和水中(或溫箱內)實測溫度是否一致,,允許有±1℃的誤差,;
◎洗板機: 每個設置洗板后的殘留液有各自的規(guī)定,一般不超過2μl,;人工扣板時,,墊紙不濕;定期檢查管孔是否堵塞,;
◎酶標儀:經常維護其光學部分,,防止濾光片霉變,定期檢測校正,,使其保持良好的工作性能,。

2、試劑盒選擇
◎應盡量選擇正規(guī),,產品經相應政府部門審核認可,,試劑應從靈敏度、特異性,、精密度,、穩(wěn)定性、簡便性,、安全性及經濟性全面評價,。
◎靈敏度:有二層含義,1)為試劑檢出被檢物質的zui低量的能力,;2)為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力,。
   ◎特異性:常用交叉反應率表示。含有與待測物相近結構部份的物質可能存在交叉反應,,使測定結果升   高,,可能導致假陽性,所以交叉反應是評價其質量的關鍵指標,。
   ◎精密度:ELISA試劑盒一般指其批內CV%,,其值應小于15%;定量試劑應同時考察線性范圍,。
   ◎準確度:通過添加回收實驗進行評價,。
   ◎簡便性:指在不影響試劑的前三項指標的前題下,,實驗和測定步驟越少越好,,在定性實驗中結果判斷簡單明了,定量試驗結果計算也應簡單,。
   ◎安全性:指試劑對操作者和環(huán)境安全無害無傳染性,。
   ◎經濟性:試劑在同等質量條件下通過大規(guī)模或技術進步降低成本,而市場價格比較合理,。
   ◎試劑評價:需要有的確證方法和確證的樣品進行檢測,。

3、樣本前處理注意事項
3.1 均質
組織樣本:肉,、肝食品類切細,,用絞肉機反復絞碎,混合均勻,。
水產樣本:去除樣品的非食用部分,,食用部分切細,用均質器均漿,;原料表面較臟時,需適當用蒸餾水清洗,。
蛋類:鮮蛋去殼,蛋黃和蛋白充分混勻,。
水果,、蔬菜類:先用水洗去泥沙,然后除去表面的水分,,取食用部分,。
3.2 振蕩提取
 將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中,振蕩,,使提取溶劑與容器內的樣品充分接觸以深入到樣本組織內部,,提取待測組分。
3.2.1振蕩方式:振蕩器上進行上下,、往返式振蕩,、手搖式上下振蕩。
3.2.2 在組織樣本中加入有機溶劑之間提取時,,應邊加邊振蕩,,防止組織凝結成團,不利于提取,。
3.3. 在用有機溶劑提取過程中,,如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,解決的方法有:①用細頭輕輕的攪拌,,破壞乳化后,,再重復離心。②再加入適量的提取劑,,重新振蕩,。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數(shù)不變。
3.4 濃縮
    由于凈化過程中引入的溶劑,,可能會降低待測組分的濃度或者不適宜直接分析,,需要去除全部有機溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮氣下吹干,再用復溶液溶解干燥殘留物,。
濃縮方式:
    ELISA試劑盒氮氣吹干除雜,、壓縮空氣吹干除雜。
注意:
3.4.1在吹干樣本之前,,用甲醇清洗針頭,,防止雜質干擾。
3.4.2在吹樣本時,,針頭應在液面上空,,避免與樣本接觸,防止產生交叉污染,。
3.4.3樣本吹干后應立即取下,,避免吹的時間過長,影響zui終檢測結果,。
3.4.4不同的藥物,,吹干后樣本的保質期不同,提倡待樣本回到室溫后立即復溶,。

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