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ELISA試劑盒樣本的檢測方法

閱讀:1414      發(fā)布時間:2015-4-24
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 血清是zui常用的ELISA試劑盒標(biāo)本之一,,ELISA檢測中血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本,,標(biāo)本中干擾性物質(zhì)是引起檢測后結(jié)果偏高或偏低的主要原因,干擾性物質(zhì)分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩大類,;

    外源性物質(zhì)常常是由于用于ELISA測定的血標(biāo)本的采集,、貯存等不當(dāng)所致。如標(biāo)本溶血,、標(biāo)本被細(xì)菌污染,、標(biāo)本貯存過久、標(biāo)本凝集 不全和采血管中添加物等影響,。

    由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血,,均可因紅細(xì)胞破壞溶解時釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過氧化物酶為標(biāo)記的 ELISA試劑盒測定中,,會導(dǎo)致非特異性顯色,,干擾測定結(jié)果。

    標(biāo)本受細(xì)菌污染 :因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,,因此,,被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果,。

    標(biāo)本保存不當(dāng) :在冰箱中保存過久的標(biāo)本,,血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體,在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深,、甚至造成檢測OD值偏高,;

    標(biāo)本凝集不全;在ELISA檢測中影響血清血漿樣本的因素很多,,ELISA試劑盒在考慮試劑因素和操作因素之外,,也應(yīng)從標(biāo)本因素方面進(jìn)行分析,。

    常見的干擾物質(zhì)有:類風(fēng)濕因子,、補體、嗜異性抗體,、嗜靶抗原自身抗體,、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig (s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等,。

    類風(fēng)濕因子 :血清中IgM,、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)在ELISA檢測中,可與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合,,從而導(dǎo)致檢測OD值偏高,。

    補體 : ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中,抗體分子發(fā)生變構(gòu),,其FC段的補體C1q分子結(jié)合位點被暴露出來,,使C1q 可以將二者連接起來,從而造成檢測OD值偏高,。

    嗜異性抗體,;人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig (s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,,也能造成檢測OD值偏高,。

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