神經(jīng)生長因子（NGF）對交感神經(jīng)和感覺神經(jīng)元系統(tǒng)的發(fā)育和維持至關(guān)重要。NGF已被證實是一種復合物,，由名為α,、β和γ亞基的三種多肽組成。其中,，亞基,，β-NGF，是一種26.9kDa的蛋白質(zhì),，含有241個殘基,，參與神經(jīng)元的存活和分化。此外,，β-NGF還是TRKA受體的配體,，而 TRKA 受體是痛覺和溫覺神經(jīng)元分化和發(fā)育所的。
標記：
1.將細胞培養(yǎng)基與EdU溶液按照500：1的比例混合,，制成2×EdU標記培養(yǎng)基,。
2.提前將2×EdU標記培養(yǎng)基預熱，然后將150微升2×EdU標記培養(yǎng)基與等體積細胞培養(yǎng)基混合,，獲得1×EdU溶液,。
【注】：
①不建議替換全部培養(yǎng)基，這樣可能會影響細胞增殖的速度,。
②配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配,，用量以沒過細胞為宜。
3.孵育細胞2h,，棄培養(yǎng)基,。
【注】：
①培養(yǎng)時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態(tài)。
②大多數(shù)腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2h的孵育時間,。
4.以1xPBS清洗細胞兩次,，每次5min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。
【注】：
對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度,。
實驗步驟：
1.將細胞以104-105個細胞/孔的密度接種在96孔板中,，加入100μL培養(yǎng)基，含或不含待測化合物,。在CO2培養(yǎng)箱中在37℃下培養(yǎng)細胞24小時,。
2.向板中加入10μL不同濃度的待測物質(zhì)。
3.在培養(yǎng)箱中將培養(yǎng)板培養(yǎng)適當時間（如6,、12,、24或48小時）,。
4.向板的每個孔中加入10μL CCK-8溶液。小心不要將氣泡引入孔中,。
5.將平板在培養(yǎng)箱中孵育1-4小時,。
6.在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻,。
7.使用酶標儀測量450nm處的吸光度,。
11
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務