轉(zhuǎn)化生長因子beta(TGF beta)家族的細(xì)胞因子無處不在,,具有多種功能,,對生存至關(guān)重要。它們在生長,、發(fā)育,、炎癥、修復(fù)和宿主免疫中發(fā)揮著核心作用,。哺乳動物的TGF beta異構(gòu)體(TGF beta 1,、beta 2 和 beta 3)作為潛在的前體分泌,擁有多種細(xì)胞表面受體,,并產(chǎn)生至少兩種介導(dǎo)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的受體,。
實驗步驟:
1.細(xì)胞培養(yǎng)
(以6孔板為參考,其他培養(yǎng)孔可根據(jù)實驗需要進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整,。)每孔1x10^5-3x10^6細(xì)胞接種于6孔板中,,培養(yǎng)至正常生長階段。
注:細(xì)胞接種量,,可根據(jù)細(xì)胞大小,、生長速度、以及實驗處理周期等調(diào)整,。
2.細(xì)胞干預(yù)或者處理
(選做)可以根據(jù)實驗需要對細(xì)胞進(jìn)行藥物或者其他刺激干預(yù)處理,。
3.細(xì)胞共孵育培養(yǎng)
根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果,用細(xì)胞培養(yǎng)基按比例稀釋溶液,,或者按比例在孔板培養(yǎng)液中加入適量的溶液與細(xì)胞共同孵育,,同時設(shè)置不添加組作為陰性對照組。每孔加入配制的稀釋后的培養(yǎng)液共同孵育2h,,去除舊培養(yǎng)液,。
更簡單:無需抗原抗體反應(yīng),,基于小分子化學(xué)反應(yīng)的檢測方法簡單高效,反應(yīng)僅需要幾分鐘,。
更靈敏:無需抗體,,檢測染料僅BrdU抗體的1/500,很容易擴(kuò)散,,即便是單個增殖細(xì)胞也能準(zhǔn)確檢測,。
更快速:無需過夜,省卻了抗原抗體反應(yīng)的復(fù)雜繁瑣步驟,,完成整個檢測周期僅需2.5小時,。
更準(zhǔn)確:無需DNA變性(酸解、熱解,、酶解等),,可有效避免變性帶來的樣品損傷,確保細(xì)胞核邊緣清晰完整,。
更兼容:對樣品幾乎無損傷,,更容易與多種抗體或熒光蛋白同時標(biāo)記,能夠同時檢測細(xì)胞其他性狀特征,。
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