轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子beta(TGF beta)家族的細(xì)胞因子無(wú)處不在,,具有多種功能,,對(duì)生存至關(guān)重要。它們?cè)谏L(zhǎng),、發(fā)育,、炎癥、修復(fù)和宿主免疫中發(fā)揮著核心作用,。哺乳動(dòng)物的TGF beta異構(gòu)體(TGF beta 1,、beta 2 和 beta 3)作為潛在的前體分泌,擁有多種細(xì)胞表面受體,,并產(chǎn)生至少兩種介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的受體,。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1.細(xì)胞培養(yǎng)
(以6孔板為參考,其他培養(yǎng)孔可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整,。)每孔1x10^5-3x10^6細(xì)胞接種于6孔板中,,培養(yǎng)至正常生長(zhǎng)階段。
注:細(xì)胞接種量,,可根據(jù)細(xì)胞大小、生長(zhǎng)速度,、以及實(shí)驗(yàn)處理周期等調(diào)整,。
2.細(xì)胞干預(yù)或者處理
(選做)可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行藥物或者其他刺激干預(yù)處理。
3.細(xì)胞共孵育培養(yǎng)
根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,,用細(xì)胞培養(yǎng)基按比例稀釋溶液,,或者按比例在孔板培養(yǎng)液中加入適量的溶液與細(xì)胞共同孵育,同時(shí)設(shè)置不添加組作為陰性對(duì)照組,。每孔加入配制的稀釋后的培養(yǎng)液共同孵育2h,,去除舊培養(yǎng)液。
更簡(jiǎn)單:無(wú)需抗原抗體反應(yīng),,基于小分子化學(xué)反應(yīng)的檢測(cè)方法簡(jiǎn)單高效,,反應(yīng)僅需要幾分鐘。
更靈敏:無(wú)需抗體,,檢測(cè)染料僅BrdU抗體的1/500,,很容易擴(kuò)散,即便是單個(gè)增殖細(xì)胞也能準(zhǔn)確檢測(cè),。
更快速:無(wú)需過(guò)夜,,省卻了抗原抗體反應(yīng)的復(fù)雜繁瑣步驟,完成整個(gè)檢測(cè)周期僅需2.5小時(shí),。
更準(zhǔn)確:無(wú)需DNA變性(酸解,、熱解,、酶解等),可有效避免變性帶來(lái)的樣品損傷,,確保細(xì)胞核邊緣清晰完整,。
更兼容:對(duì)樣品幾乎無(wú)損傷,更容易與多種抗體或熒光蛋白同時(shí)標(biāo)記,,能夠同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞其他性狀特征,。
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