犬免疫球蛋白M(IgM)elisa試劑盒洗滌方法:
1. 自動洗板機:每孔加入洗滌液350μl,注入與吸出間隔60秒,。洗板5次,。
2. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,在潔凈的吸水紙上拍干,,每孔加洗滌液350μl,,浸泡1-2分鐘,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體,,在厚的吸水紙上拍干,。洗板5次。
實驗開始前,,各試劑均應平衡至室溫,;試劑或樣品配制時,均需充分混勻,,并盡量避免起泡,。
1.加樣:分別設空白孔、標準孔,、待測樣品孔,。空白孔加樣品稀釋液100μl,,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,,注意不要有氣泡,加樣時將樣品加于酶標板底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻。給酶標板覆膜,,37℃孵育2小時,。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液,。
2.棄去液體,,甩干,每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制),,酶標板加上覆膜,,37℃溫育1小時。
3.棄去孔內(nèi)液體,,甩干,,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,,大約350μl /每孔,,甩并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干,。
干4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl,加上覆膜,,37℃溫育1小時,。
5.棄去孔內(nèi)液體,甩干,,洗板5次,,方法同步驟3。
6.每孔加底物溶液100μl,,酶標板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實際顯色情況酌情縮短或延長,,但不可超過30分鐘。當標準孔出現(xiàn)明顯梯度時,,即可終止),。
7.每孔加終止液50μl,終止反應,,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同,。
8.立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值),。應提前打開酶標儀電源,預熱儀器,,設置好檢測程序,。
9.實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結束。
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