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3磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)生化檢測(cè)試劑盒測(cè)定意義

GAPDH催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸,，是糖酵解途徑的關(guān)鍵酶,，與糖異生途徑,、體內(nèi)血糖濃度的維持和糖尿病的發(fā)生密切相關(guān)，在機(jī)體糖,、脂,、蛋白代謝紊亂疾病中發(fā)揮重要作用。

測(cè)定原理

3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸,。GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛,、無(wú)機(jī)磷和NAD，340nm處測(cè)定NADH的減少量可反映GADPH活性的高低,。

需自備的儀器和用品

分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī),、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板、研缽,、冰和蒸餾水,。粗酶液提取：

1,、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g,，4℃離心20min,，取上清置冰上待測(cè)。

2,、細(xì)菌,、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w,，超聲3秒,，間隔7秒，總時(shí)間3min）,；16000g,， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測(cè),。

3,、血清等液體：直接測(cè)定。