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原代培養(yǎng)：

原代培養(yǎng)是指細(xì)胞從組織中分離出來后,，在適宜條件下增殖，直到它們占據(jù)所有可用的基質(zhì)（即達(dá)到匯合狀態(tài)）的培養(yǎng)階段,。在此階段,，必須通過將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮生長培養(yǎng)基的新容器中進(jìn)行繼代培養(yǎng)（即傳代），以為其提供更多的繼續(xù)生長空間,。

細(xì)胞系：

第一次傳代培養(yǎng)后,，原代培養(yǎng)物即被稱為細(xì)胞系,。來自于原代培養(yǎng)的細(xì)胞系壽命有限（即：有限細(xì)胞系），隨著細(xì)胞的傳代,，生長能力的細(xì)胞會占據(jù)優(yōu)勢,，最終導(dǎo)致細(xì)胞群體在基因型和表型上達(dá)到一定程度的均一性。

細(xì)胞株：

如果通過克隆或其他方法從培養(yǎng)物中陽性篩選出了細(xì)胞系的亞群,，則該細(xì)胞系成為一個(gè)細(xì)胞株,。與親代細(xì)胞系起始時(shí)相比，細(xì)胞株通常會獲得一些其他的遺傳學(xué)改變,。

注意事項(xiàng)：

（1）無菌操作：細(xì)菌或霉菌污染是培養(yǎng)失敗的常見原因,，必須加強(qiáng)各個(gè)環(huán)節(jié)的無菌操作觀念，以預(yù)防為主,，一旦污染,，一般很難消除。

（2）培養(yǎng)液：所用的培養(yǎng)液必須滿足細(xì)胞生存和生長的必要條件,。由于細(xì)胞來源的動物種類,、組織類型不同，對培養(yǎng)液的要求有一定的差異,，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液,。

（3）胎牛血清：胎牛血清對于維持培養(yǎng)細(xì)胞的生存和促進(jìn)細(xì)胞增殖起著關(guān)鍵性作用?？蛇x擇多種不同批號的胎牛血清進(jìn)行小樣分析,。一旦確定某一廠家的某一批號胎牛血清后，就保持應(yīng)用至實(shí)驗(yàn)完成,。

（4）：必須新鮮配制,，貯存時(shí)間過長(即使是-20℃低溫保存)，也將影響消化效力,，導(dǎo)致消化時(shí)間過長,，細(xì)胞損傷增加。

（5）L-幾乎所有細(xì)胞對有較高的要求,，細(xì)胞需要核酸和蛋白質(zhì),，在缺時(shí)，細(xì)胞會因生長不良而死亡,。液中很不穩(wěn)定,，加有養(yǎng)液在4℃冰箱貯存兩周以上時(shí)，就應(yīng)重新加入原來量的,。

（6）靜置培養(yǎng)：原代細(xì)胞在消化分離后,，置于CO2培養(yǎng)箱的頭24～48h (必要時(shí)72h)內(nèi)，應(yīng)處于絕對靜置狀態(tài)，切忌不時(shí)地取出培養(yǎng)瓶觀察生長狀況,，這將使原代分離細(xì)胞難以貼壁,，更談不上伸展和增殖，初學(xué)者尤應(yīng)注意,。不必?fù)?dān)心培養(yǎng)液中的營養(yǎng)成分會消耗光,，在細(xì)胞增殖之前對營養(yǎng)的要求并不大。原代培養(yǎng)初期僅加一薄層培養(yǎng)液的目的也在于有利于細(xì)胞貼壁伸展,。

（7）消化時(shí)間：一般消化至肉眼尚可見微小組織顆粒即可,，因?yàn)榇藭r(shí)組織顆粒已經(jīng)松散，略經(jīng)吹打即成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞,，過久的消化往往導(dǎo)致細(xì)胞損傷加重,，細(xì)胞培養(yǎng)成活率降低。

（8）其他生長因子：經(jīng)過以上處理,，一般原代分離細(xì)胞培養(yǎng)均可以成功,。對于少數(shù)特殊類型細(xì)胞也可以考慮加一些特殊的生長因子，如胰島素能促使細(xì)胞攝取葡萄糖和氨基酸,。另外,，內(nèi)毒素,、EGF,、FGF等均有促有絲分裂作用，但費(fèi)用較高,。