組織塊直接培養(yǎng)法（原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)）
材料與儀器
【動(dòng)物】選擇大約一半足孕時(shí)間的胚胎,，10－13天齡胚胎含有最大數(shù)量的未分化的間質(zhì)細(xì)胞,，成纖維細(xì)胞可從這些細(xì)胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個(gè)
【實(shí)驗(yàn)材料】每組的超凈臺(tái)中有以下物品：
1,、50ml配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶,；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶,；PBS(-)1瓶
2,、100ml滅菌燒杯2個(gè)
3、50ml離心筒2個(gè)
4,、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè),，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml,，200μl移液器各1支,；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6,、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊
7,、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把
8,、酒精燈1臺(tái)
步驟：
1) 胚胎的分離,。適用哺乳動(dòng)物(倉(cāng)鼠、小鼠和大鼠),。
2)將1－2個(gè)胚胎轉(zhuǎn)移至一個(gè)小的無(wú)菌培養(yǎng)皿中,，用新的無(wú)菌剪刀小心地絞碎胚胎，用PBS漂洗,。
3)在無(wú)菌狀態(tài)下,，將絞碎的胚胎轉(zhuǎn)移于一50ml的無(wú)菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無(wú)菌,用攪拌棒輕輕攪動(dòng),。
4)在溫暖的環(huán)境中或置于37°C培養(yǎng)箱中輕輕搖動(dòng)15分鐘。
5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降,，將含有懸浮細(xì)胞的液體轉(zhuǎn)移至一無(wú)菌50ml的離心管中,，該管內(nèi)按照每10ml上清加入lml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。
6)加人新鮮溶液(見(jiàn)前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來(lái)的50ml離心筒中,，重復(fù)步驟4和5,。
7)離心混合的細(xì)胞懸液，1200r/rain,，5分鐘,，棄上清,。
8)用新鮮的無(wú)菌PBS重懸沉淀的細(xì)胞,，按步驟7再次離心。
9)用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞直至上清清亮為止,。
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