樣品收集,、處理及保存方法:
1,、血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2,、血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清,。
3,、細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4,、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5,、保存:如果樣本收集后不及時檢測,,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
1,、血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。
仔細(xì)收集上清,,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心,。
2,、血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心,。
3,、尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實行。
4,、細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。
5、組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,,稱取重量,。加入一定量的PBS,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測,,其余冷凍備用。
6、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7、不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
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