在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,，并設(shè)計(jì)引物做啟動子，加入DNA聚合酶,、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制,。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）。發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷,、同時(shí)也大大降低了成本,，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,；
②堿基配對原則,；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的,。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,，結(jié)合的特異性大大增加,，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),，其特異性程度就更高,。
靈敏度高：
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞,；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位),；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌,。
簡便、快速：
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,，一次性地將反應(yīng)液加好后,，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng),。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素,，無放射性污染,、易推廣。
對標(biāo)本的純度要求低：
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板,。可直接用臨床標(biāo)本如血液,、體腔液,、洗嗽液、毛發(fā),、細(xì)胞,、活PCR技術(shù)概論。
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