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纖維肉瘤細(xì)胞注意事項：

（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞最好在對數(shù)生長期,，細(xì)胞密度適合,，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好,，而且消化時不容易分散,；

（2）凍存的密度不宜過低，10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好,，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107）,，一瓶凍一管（1.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個細(xì)胞）分成兩管,。

（3）消化和吹打,，切忌胰酶消化過度，吹打不可太用力,，最好不要吹出好多泡泡,。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦,，不是加入凍存液再吹打。

（4）離心后加入凍存液,。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格,，我從10%-90%都用過，問題不大,，個人認(rèn)為10%-20%可以了,，能節(jié)約處就節(jié)約點嘛！另外,，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置,，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸,，移入凍存管,。

（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法,，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好,，4度2h，-20度2h或更長,，-80度過夜,，最后液氮。對于條件較好的實驗室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實驗室,，推薦使用程序降溫盒,，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫,，很方便,，省了包棉花、4度,、-20度了,。

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