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磷酸化上皮細(xì)胞癌轉(zhuǎn)化蛋白2抗體的制備過(guò)程

閱讀:955      發(fā)布時(shí)間:2022-5-5
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磷酸化上皮細(xì)胞癌轉(zhuǎn)化蛋白2抗體的制備過(guò)程:

1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過(guò)分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,,純化鑒定后可直接作為免疫原,;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,,常見(jiàn)偶聯(lián)載體如BSA,、OVA、HAS等,。

2. 免疫動(dòng)物:常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠,、家兔、雞,、大小鼠等,,大量時(shí)需要用到狗、綿羊,、山羊等,。

3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊,、山羊可采用靜動(dòng)脈采血,,家兔、豚鼠,、大鼠,、雞可采用心臟采血,家兔,、山羊,、綿羊可采用靜脈采血。

4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,,具有高效,特異性強(qiáng),,純度高的特定,。接著要鑒定純化蛋白的含量,、相對(duì)分子的質(zhì)量,、純度以及特異性,。

5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià),,而真空干燥保存時(shí)間可以更久,。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。

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