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小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1elisa試劑盒操作步驟

閱讀:981      發(fā)布時間:2022-2-24
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小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)elisa試劑盒操作步驟:


1.         標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,,在、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,,然后在,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻,;然后從孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三,、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,,再各取50μl分別加到第五,、第六孔中,再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻,;混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,,再在第七,、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中,,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,,濃度分別為1800ng/L,1200ng/L ,,600ng/L,,300ng/L, 150ng/L),。


2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同)、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品*終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻。


3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。


4.         配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用,。


5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,,拍干。


6.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外,。


7.         溫育:操作同3。


8.         洗滌:操作同5,。


9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.


10.     終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。


11.     測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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