植物ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)原理：
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中植物羥基自由基水平,。用純化的植物羥基自由基抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入植物羥基自由基，再與HRP標(biāo)記的羥基自由基抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。
TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色,。顏色的深淺和樣品中的植物羥基自由基呈正相關(guān)。
用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度,，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中植物羥基自由基濃度,。
植物ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)操作步驟如下：
1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照?qǐng)D表在小試管中進(jìn)行稀釋,。
2、加樣：分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻。
3,、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用,。
5,、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。
6,、加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑,，空白孔除外。
7,、溫育：操作同3,。
8、洗滌：操作同5,。
9,、顯色：每孔先加入顯色劑,，再加入顯色劑B，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘,。
10、終止：每孔加終止液,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11、測(cè)定：以空白空調(diào)零,，依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,，測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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