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人橋粒芯糖蛋白-1(DGS-E1)免疫組化試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟

閱讀:933      發(fā)布時(shí)間:2021-12-9
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人橋粒芯糖蛋白-1(DGS-E1)免疫組化試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟:


1.烤片: 將待做切片置于切片架上,,于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr;石蠟包埋組織切片3~4μm 厚度


2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3 次(即二甲苯Ⅰ,、Ⅱ,、Ⅲ),每次10 min,;


3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,,無(wú)水乙醇5min,95%乙醇2 次(每次2min),,85%乙醇2 min,;75%乙醇2min,自來(lái)水沖洗,,ddH2O 洗2×2min,;


4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說(shuō)明書(shū)推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù),常采用高壓,、微波(溫度達(dá)到98~100℃)或酶消化修復(fù)法,,室溫自然冷卻,自來(lái)水沖洗,,ddH2O 洗2×2min,,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復(fù)方法見(jiàn)附1)* 注:有些抗原勿需修復(fù),

直接進(jìn)入第5 步封閉,。


5.封閉: 滴加試劑B,,37℃濕盒孵育30 min;


6.加一抗:滴加用試劑C(即用型一抗),,37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過(guò)夜,;


7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);


8.封閉: 滴加試劑B,,37℃濕盒孵育10 min,;


9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑D),37℃濕盒中孵育30 min,;


10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),;


11.封閉: 滴加試劑Tween 20,37℃濕盒孵育封閉20 min,;


12.加HRP-SA: 滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑E(1:50~200,,終濃度5~20 nM),37℃濕盒中孵育30 min,;


13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),,TBS 洗滌(2×5 min);


14.顯色:應(yīng)用DAB 溶液(試劑F)顯色,;


15.復(fù)染:自來(lái)水充分沖洗,,復(fù)染,,脫水,透明,;


16.封片: 待組織標(biāo)本干后,,用試劑緩沖甘油封固劑封片;


17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像,。

磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體

雙調(diào)蛋白(結(jié)腸直腸細(xì)胞源性生長(zhǎng)因子)抗體

磷酸化水通道蛋白2抗體

粘附相關(guān)激酶抗體

磷酸化粘附相關(guān)激酶抗體

磷酸化蛋白激酶B抗體

磷酸化水通道蛋白2抗體

磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體

磷酸化蛋白激酶B抗體

磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體

磷酸化活化轉(zhuǎn)錄因子4抗體

磷酸化雄激素受體抗體

磷酸化雄激素受體抗體

磷酸化蛋白激酶AKT1,2,3抗體

磷酸化蛋白激酶B抗體

磷酸化活化復(fù)制因子2抗體

凋亡相關(guān)蛋白3抗體

自噬相關(guān)蛋白18抗體

自噬相關(guān)蛋白4A抗體

載脂蛋白A4抗體

12脂氧合酶抗體

血管緊張素III抗體

腺苷酸環(huán)化酶3抗體

血管動(dòng)蛋白抗體

腺病毒早期E1A蛋白抗體

磷酸化活化復(fù)制因子2抗體

磷酸化活化復(fù)制因子2抗體

磷酸化失調(diào)癥蛋白1抗體

錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體


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