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駱駝痘病毒PCR檢測(cè)試劑盒準(zhǔn)備試劑與收集血樣步驟

閱讀:1021      發(fā)布時(shí)間:2021-4-1
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駱駝痘病毒PCR檢測(cè)試劑盒準(zhǔn)備試劑與收集血樣步驟:
雙重核酸試劑盒(熒光PCR法) 1.  收集標(biāo)本:血清,、血漿(EDTA ,、檸檬酸鹽、肝素抗凝),、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿等盡早檢測(cè), 2-8 ℃ 保存48 小時(shí);更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍( -20   ℃或 -70   ℃ )保存,,避免反復(fù)凍融,。
2.  標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 ,。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管,,管加標(biāo)本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul ,。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,,移至第二管 。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋,,從第七 管 中吸出 500ul 棄去,。第八 管 為空白對(duì)照。
3.  10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水),。
4.  洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
檢測(cè)程序:
1.  加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ,,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2.  洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,,向?yàn)V紙上印干,。
3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘,。
4.  洗板:同前,。
5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘,。
6.  洗板:同前,。
7.  每孔加入底物工作液100ul ,置 37   ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘,。
8.  每孔加入100ul 終止液混勻,。
9.  30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測(cè) 吸光值。 Avian Leukosis Virus(ALV)禽白血病病毒通用RT-LAMP試劑盒
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Avian Reovirus(ARV)禽呼腸孤病毒RT-LAMP試劑盒
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