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細(xì)胞色素試劑盒的使用方法和注意事項(xiàng)

閱讀:1304      發(fā)布時(shí)間:2021-3-27
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   細(xì)胞色素試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗(yàn)(ELISA),。往預(yù)先包被人細(xì)胞色素C(Cyt-C)捕獲抗體的包被微孔中,,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,,經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺和樣品中的人細(xì)胞色素C(Cyt-C)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),,計(jì)算樣品濃度。
 
  細(xì)胞色素試劑盒的使用方法:
  1、樣品處理:
 ?、僖后w食品:取約30m1樣品置于燒杯中,,加熱除去酒精或二氧化碳,備用,。
 ?、诠腆w食品:稱取搗碎的樣品約10克,置于燒杯中,,加30m1水,,搖勻后過(guò)濾,濾液備用,。
 
  2,、測(cè)定:取一燒杯,加入處理后的樣品液10m1,,加入檢測(cè)液A5滴,,搖勻;用PH試紙沾取燒杯內(nèi)的液體檢查PH值是否在8-9之間,,如未到,,再滴入檢測(cè)液A調(diào)整到PH值在8-9之間,然后加檢測(cè)試棉B少許,,令其浸入液體中,,在90-100℃的水浴中加熱,1分鐘后攪拌試棉并將液體中的檢測(cè)試棉B取出,,用清水漂洗試棉,,如試棉染上的顏色不褪的為非食用色素。為便于判斷,,可取檢測(cè)試棉B少許,,用水浸濕后對(duì)比觀察。
 
  細(xì)胞色素試劑盒的注意事項(xiàng):
  1,、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
 
  2,、濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,,洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
 
  3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器,,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,,以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,,推薦使用排槍加樣,。
 
  4、請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),,請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)后再測(cè)定,,計(jì)算時(shí)請(qǐng)乘以總稀釋倍數(shù)。

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