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兔載脂蛋白B100elisa檢測試劑盒雙抗體夾心法

閱讀:909      發(fā)布時間:2021-1-6
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 兔載脂蛋白B100elisa檢測試劑盒雙抗體夾心法:

1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml,。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜,。次日,,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,,每次3分鐘,。(簡稱洗滌,下同),。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌,。(同時做空白孔,,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標抗體:于各反應孔中,,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml,。37℃ 孵育0.5~1小時,,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃ 10~30分鐘,。
5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結果判定:可于白色背景上,,直接用肉眼觀察結果:反應孔內(nèi)顏色越深,,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,,依據(jù)所呈顏色的深淺,,以“+”、“-”號表示,。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性,。

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