耐藥細(xì)胞的特性:
1)細(xì)胞來源于人正常口腔黏膜組織,。
2)細(xì)胞鑒定:Vimentin免疫熒光染色為陽性,。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌,。
5)細(xì)胞生長方式:不規(guī)則細(xì)胞,長梭形,,貼壁培養(yǎng),。
耐藥細(xì)胞的操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管,,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基,。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,,裝滿37℃的水,,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中),。輕輕晃動(dòng)凍存管,,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段,。注意凍存管管口不能沒入水中,,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),,將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),,輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,,降低DMSO濃度,,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi),。
4)800rpm離心5min,棄上清,,加入新鮮的培養(yǎng)基,,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),,補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng),。
6)產(chǎn)品僅用于科研觀察細(xì)胞貼壁生長情況,,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),,待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代,。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn),。
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