瘧原蟲探針法熒光定量PCR試劑盒原理簡述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,,該探針為一寡核苷酸,,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收,;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,,就有一個熒光分子形成,,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進行基因定量分析,,又可分析基因突變(SNP),,有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術(shù)平臺。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應(yīng)體系中,,加入過量SYBR熒光染料,,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,,確定PCR反應(yīng)是否特異,。
3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,,導(dǎo)致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,,不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,,退火過程中,,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 ,。
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