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傘枝梨頭霉PCR試劑盒的設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循哪些原則

閱讀:1309      發(fā)布時(shí)間:2020-11-25
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   傘枝梨頭霉PCR試劑盒可用于檢測(cè)食品或其他材料中是否有的成分?,F(xiàn)代食品加工工藝改變了食材原有的味道,、氣味、色澤,、紋理和質(zhì)地等特性,,因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無法對(duì)食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。同時(shí)部分食材還有致敏性,,因此基于基因檢測(cè)的快速靈敏的食材來源檢測(cè)技術(shù)將對(duì)食品監(jiān)管和安全提供重要的保障,。
 
  特點(diǎn):
  1.即開即用,用戶只需要提供病毒DNA模板,。
  2.引物經(jīng)過優(yōu)化,,靈敏性比使用世界動(dòng)物衛(wèi)生組織推薦的引物高100倍以上。
  3.特異性高,,引物是根據(jù)保守的vp72基因設(shè)計(jì),。
  4..提供陽(yáng)性對(duì)照,便于分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
  5.PCRmix中含上樣染料,,PCR后可以直接上樣電泳。本試劑盒足夠做40μL體系的PCR50次,,只能用于科研,。
 
  傘枝梨頭霉PCR試劑盒設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
 ?、僖镩L(zhǎng)度:15-30bp,常用為20bp左右,。
 ?、谝飻U(kuò)增跨度:以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段,。
 ?、垡飰A基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶,。ATGC好隨機(jī)分布,,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列,。
  ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),,避免兩條引物間互補(bǔ),,特別是3’端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶,。
  ⑤引物3’端的堿基,,特別是倒數(shù)第二個(gè)堿基,,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗,。
 ?、抟镏杏谢蚰芗由虾线m的酶切位點(diǎn),被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn),,這對(duì)酶切分析或分子很有好處,。
  ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性,。

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